重庆医科大学学报
重慶醫科大學學報
중경의과대학학보
UNIVERSITATIS SCIENTIAE MEDICINAE CHONGQING
2009年
1期
16-19
,共4页
杨琴%符州%田代印%刘恩梅%王莉佳%黄英
楊琴%符州%田代印%劉恩梅%王莉佳%黃英
양금%부주%전대인%류은매%왕리가%황영
哮喘%信号传导子及转录激活因子%RNA干扰%shRNA%质粒
哮喘%信號傳導子及轉錄激活因子%RNA榦擾%shRNA%質粒
효천%신호전도자급전록격활인자%RNA간우%shRNA%질립
目的:构建并鉴定小鼠信号转导子和转录激活因子4(STAT4),信号转导子和转录激活因子6(STAT6)具有发夹结构小干扰RNA(shRNA)表达质粒.方法:根据STAT4和STAT6基因mRNA序列,在体外分别合成有小发夹结构的2条STAT4特异性寡核苷酸序列,2条STAT6特异性寡核苷酸序列,退火后与线性化pGenesil-3质粒连接,转化感受态细胞DH5α,扩增,纯化得到所需质粒.同时设计构建分别针对小鼠甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)的干扰质粒作为阳性对照,不具有基因同源性的非特异性基因的质粒作为阴性对照序列.通过酶切后琼脂糖凝胶电泳和基因测鉴定纯化质粒分子量及插入片段的序列.结果:经限制性酶切和测序鉴定分析证实基因插入正确,与设计的序列完全相符.结论:成功构建了针对小鼠STAT4,STAT6基因的发夹结构小干扰RNA表达载体.为今后利用基因沉默技术从转录后水平抑制STAT4,STAT6的研究奠定基础.
目的:構建併鑒定小鼠信號轉導子和轉錄激活因子4(STAT4),信號轉導子和轉錄激活因子6(STAT6)具有髮夾結構小榦擾RNA(shRNA)錶達質粒.方法:根據STAT4和STAT6基因mRNA序列,在體外分彆閤成有小髮夾結構的2條STAT4特異性寡覈苷痠序列,2條STAT6特異性寡覈苷痠序列,退火後與線性化pGenesil-3質粒連接,轉化感受態細胞DH5α,擴增,純化得到所需質粒.同時設計構建分彆針對小鼠甘油醛-3-燐痠脫氫酶(GAPDH)的榦擾質粒作為暘性對照,不具有基因同源性的非特異性基因的質粒作為陰性對照序列.通過酶切後瓊脂糖凝膠電泳和基因測鑒定純化質粒分子量及插入片段的序列.結果:經限製性酶切和測序鑒定分析證實基因插入正確,與設計的序列完全相符.結論:成功構建瞭針對小鼠STAT4,STAT6基因的髮夾結構小榦擾RNA錶達載體.為今後利用基因沉默技術從轉錄後水平抑製STAT4,STAT6的研究奠定基礎.
목적:구건병감정소서신호전도자화전록격활인자4(STAT4),신호전도자화전록격활인자6(STAT6)구유발협결구소간우RNA(shRNA)표체질립.방법:근거STAT4화STAT6기인mRNA서렬,재체외분별합성유소발협결구적2조STAT4특이성과핵감산서렬,2조STAT6특이성과핵감산서렬,퇴화후여선성화pGenesil-3질립련접,전화감수태세포DH5α,확증,순화득도소수질립.동시설계구건분별침대소서감유철-3-린산탈경매(GAPDH)적간우질립작위양성대조,불구유기인동원성적비특이성기인적질립작위음성대조서렬.통과매절후경지당응효전영화기인측감정순화질립분자량급삽입편단적서렬.결과:경한제성매절화측서감정분석증실기인삽입정학,여설계적서렬완전상부.결론:성공구건료침대소서STAT4,STAT6기인적발협결구소간우RNA표체재체.위금후이용기인침묵기술종전록후수평억제STAT4,STAT6적연구전정기출.
