CAJ | 학술논문

本研究探讨中药雷公藤内酯醇(triptolide,TPL)对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞中抑癌基因--apc基因去甲基化作用,并对其机制进行初步探讨.采用生长曲线、MTT法、集落形成实验及流式细胞术DNA含量分析法分别探讨TPL对Jurkat细胞生长、增殖及细胞周期的影响.以巢式甲基特异性PCR检测TPL对Jurkat细胞apc基因甲基化模式的影响,半定量RT-PCR检测TPL作用后Jurkat细胞apc基因、甲基转移酶dnmt3a、dnmt3bmRNA的表达,Western blot检测TPL作用前后APC蛋白的表达水平.结果表明:与对照组相比,不同浓度TPL均能明显抑制Jurkat细胞生长、增殖,并呈时间及剂量依赖性,48小时IC50为19.7 ng/ml;未处理组Jurkat细胞基因组DNA的胞嘧啶保持不变,而经TPL作用的Jurkat细胞基因组DNA的胞嘧啶均已变为胸腺嘧啶,这表明Jurkat细胞存在apc基因甲基化;TPL作用后apc基因的高甲基化被逆转,并呈剂量依赖性;未处理组APC蛋白不表达,TPL作用48小时后APC蛋白表达增强,亦呈剂量依赖性.结论:小剂量TPL可明显抑制Jurkat细胞的生长;TPL可通过甲基转移酶和(或)直接作用使apc基因去甲基化,使apc基因表达上调,恢复其活性,从而抑制Jurkat细胞的增殖.
본연구탐토중약뢰공등내지순(triptolide,TPL)대급성T림파세포백혈병Jurkat세포중억암기인--apc기인거갑기화작용,병대기궤제진행초보탐토.채용생장곡선、MTT법、집락형성실험급류식세포술DNA함량분석법분별탐토TPL대Jurkat세포생장、증식급세포주기적영향.이소식갑기특이성PCR검측TPL대Jurkat세포apc기인갑기화모식적영향,반정량RT-PCR검측TPL작용후Jurkat세포apc기인、갑기전이매dnmt3a、dnmt3bmRNA적표체,Western blot검측TPL작용전후APC단백적표체수평.결과표명:여대조조상비,불동농도TPL균능명현억제Jurkat세포생장、증식,병정시간급제량의뢰성,48소시IC50위19.7 ng/ml;미처리조Jurkat세포기인조DNA적포밀정보지불변,이경TPL작용적Jurkat세포기인조DNA적포밀정균이변위흉선밀정,저표명Jurkat세포존재apc기인갑기화;TPL작용후apc기인적고갑기화피역전,병정제량의뢰성;미처리조APC단백불표체,TPL작용48소시후APC단백표체증강,역정제량의뢰성.결론:소제량TPL가명현억제Jurkat세포적생장;TPL가통과갑기전이매화(혹)직접작용사apc기인거갑기화,사apc기인표체상조,회복기활성,종이억제Jurkat세포적증식.