猪IgGⅡB类Fc受体剪接异构体胞外区及结构域的原核表达与抗体制备
저IgGⅡB류Fc수체전접이구체포외구급결구역적원핵표체여항체제비
Prokaryotic expression of functional extracellular domain and structural domains of porcine FcγRIIB by alternative splicing and preparation of polyclonal antibodies
  • 万方数据
    河南农业大学学报 하남농업대학학보
    ACTA AGRICULTURAE UNIVERSITATIS HENANENSIS
    2011年 3期 307-312 ,共6页

    刘肖萍%张志远%刘玉松%赵琳%范旭%徐红运%张凤华%夏平安%崔保安

    류초평%장지원%류옥송%조림%범욱%서홍운%장봉화%하평안%최보안

    猪%FcγRHB%原核表达%蛋白纯化%多克隆抗体 豬%FcγRHB%原覈錶達%蛋白純化%多剋隆抗體
    저%FcγRHB%원핵표체%단백순화%다극륭항체
    根据GenBank中猪IgGⅡB类Fc受体剪切异构体基因序列(FJ608551),利用Primer 5.0软件设计合成3对特异性引物,从质粒pTG 19 -T-swFcγRIIB1中用PCR方法扩增编码胞外区、EC1及EC2结构域蛋白分子基因片段,PCR产物经KpnⅠ和EcoR Ⅰ双酶切后将其插入到原核表达载体pET-32a中,构建了3种猪FcγRIIB剪接异构体原核表达载体pET-EY,pET-AY,pET-BY,转化大肠杆菌BL21,在IPTG诱导下成功表达了相对分子质量约为36,29,27 kD融合蛋白表达,纯化后的融合蛋白分别免疫小鼠制备鼠源血清.ELISA结果显示抗体效价为1:5 120,1:5 120,1:10 240.免疫印迹结果显示制备的多克隆抗体可以与融合蛋白特异性结合.
    근거GenBank중저IgGⅡB류Fc수체전절이구체기인서렬(FJ608551),이용Primer 5.0연건설계합성3대특이성인물,종질립pTG 19 -T-swFcγRIIB1중용PCR방법확증편마포외구、EC1급EC2결구역단백분자기인편단,PCR산물경KpnⅠ화EcoR Ⅰ쌍매절후장기삽입도원핵표체재체pET-32a중,구건료3충저FcγRIIB전접이구체원핵표체재체pET-EY,pET-AY,pET-BY,전화대장간균BL21,재IPTG유도하성공표체료상대분자질량약위36,29,27 kD융합단백표체,순화후적융합단백분별면역소서제비서원혈청.ELISA결과현시항체효개위1:5 120,1:5 120,1:10 240.면역인적결과현시제비적다극륭항체가이여융합단백특이성결합.
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