农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2005年
6期
713-717
,共5页
郝彦玲%朱本忠%朱鸿亮%栾春光%罗云波%段晓昱
郝彥玲%硃本忠%硃鴻亮%欒春光%囉雲波%段曉昱
학언령%주본충%주홍량%란춘광%라운파%단효욱
向日葵%根癌农杆菌%GUS染色%遗传转化
嚮日葵%根癌農桿菌%GUS染色%遺傳轉化
향일규%근암농간균%GUS염색%유전전화
采用携带gus和hpt基因双元表达载体pCAMBIA1301的根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)EHA105对向日葵(Helianthus annuus)品种新葵杂6号的茎尖分生组织进行遗传转化,以共培养后7 d外植体的gus基因纯合表达频率为指标测定转化率.结果表明,潮霉素适宜的筛选浓度为10mg/L,根癌农杆菌侵染浓度OD600=0.8,果胶酶(0.05%)与纤维素酶(0.1%)共同消化外植体30 min,共培养温度24℃,共培养培养基中添加乙酰丁香酮(ACS)100μmol/L,向日葵茎尖gus基因纯合表达率高达32.8%.对抗性苗进行PCR和Southern blot检测,初步证明T-DNA上的hpt基因已整合向日葵的基因组中.
採用攜帶gus和hpt基因雙元錶達載體pCAMBIA1301的根癌農桿菌(Agrobacterium tumefaciens)EHA105對嚮日葵(Helianthus annuus)品種新葵雜6號的莖尖分生組織進行遺傳轉化,以共培養後7 d外植體的gus基因純閤錶達頻率為指標測定轉化率.結果錶明,潮黴素適宜的篩選濃度為10mg/L,根癌農桿菌侵染濃度OD600=0.8,果膠酶(0.05%)與纖維素酶(0.1%)共同消化外植體30 min,共培養溫度24℃,共培養培養基中添加乙酰丁香酮(ACS)100μmol/L,嚮日葵莖尖gus基因純閤錶達率高達32.8%.對抗性苗進行PCR和Southern blot檢測,初步證明T-DNA上的hpt基因已整閤嚮日葵的基因組中.
채용휴대gus화hpt기인쌍원표체재체pCAMBIA1301적근암농간균(Agrobacterium tumefaciens)EHA105대향일규(Helianthus annuus)품충신규잡6호적경첨분생조직진행유전전화,이공배양후7 d외식체적gus기인순합표체빈솔위지표측정전화솔.결과표명,조매소괄의적사선농도위10mg/L,근암농간균침염농도OD600=0.8,과효매(0.05%)여섬유소매(0.1%)공동소화외식체30 min,공배양온도24℃,공배양배양기중첨가을선정향동(ACS)100μmol/L,향일규경첨gus기인순합표체솔고체32.8%.대항성묘진행PCR화Southern blot검측,초보증명T-DNA상적hpt기인이정합향일규적기인조중.
