细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2006年
5期
660-663
,共4页
谢琳娜%张娜%陈明谅%李勤喜%周化民
謝琳娜%張娜%陳明諒%李勤喜%週化民
사림나%장나%진명량%리근희%주화민
RIP3%多克隆抗体%亚细胞定位%caspase非依赖的细胞凋亡途径
RIP3%多剋隆抗體%亞細胞定位%caspase非依賴的細胞凋亡途徑
RIP3%다극륭항체%아세포정위%caspase비의뢰적세포조망도경
目的:制备兔抗受体相互作用蛋白-3(RIP3)的抗体,并探讨其在鼠源NIH3T3细胞株中的定位.方法:用RT-PCR技术从NIH3T3细胞株中克隆鼠rip3基因,进行原核表达及电洗脱纯化.以高纯度的RIP3抗原免疫新西兰兔制备抗血清并纯化.用Western blot检测该抗体的特异性,以免疫荧光法确定RIP3在NIH3T3细胞株中的定位,以及TNF-α和z-VAD.fmk对其定位的影响.结果:获得特异性的兔抗RIP3蛋白的抗体.免疫荧光的结果显示,RIP3定位于细胞质中.单用TNF-α或z-VAD.fmk处理NIH3T3细胞后,RIP3的定位均无明显变化;而用z-VAD.fmk和TNF-α共同处理细胞后,在核内外均有RIP3分布.结论:成功地克隆rip3基因并制备高特异性的兔抗RIP3抗体.RIP3在NIH3T3细胞株中定位于细胞质中,为进一步研究RIP3在TNF-α诱导的caspase非依赖的细胞凋亡途径中的作用奠定了基础.
目的:製備兔抗受體相互作用蛋白-3(RIP3)的抗體,併探討其在鼠源NIH3T3細胞株中的定位.方法:用RT-PCR技術從NIH3T3細胞株中剋隆鼠rip3基因,進行原覈錶達及電洗脫純化.以高純度的RIP3抗原免疫新西蘭兔製備抗血清併純化.用Western blot檢測該抗體的特異性,以免疫熒光法確定RIP3在NIH3T3細胞株中的定位,以及TNF-α和z-VAD.fmk對其定位的影響.結果:穫得特異性的兔抗RIP3蛋白的抗體.免疫熒光的結果顯示,RIP3定位于細胞質中.單用TNF-α或z-VAD.fmk處理NIH3T3細胞後,RIP3的定位均無明顯變化;而用z-VAD.fmk和TNF-α共同處理細胞後,在覈內外均有RIP3分佈.結論:成功地剋隆rip3基因併製備高特異性的兔抗RIP3抗體.RIP3在NIH3T3細胞株中定位于細胞質中,為進一步研究RIP3在TNF-α誘導的caspase非依賴的細胞凋亡途徑中的作用奠定瞭基礎.
목적:제비토항수체상호작용단백-3(RIP3)적항체,병탐토기재서원NIH3T3세포주중적정위.방법:용RT-PCR기술종NIH3T3세포주중극륭서rip3기인,진행원핵표체급전세탈순화.이고순도적RIP3항원면역신서란토제비항혈청병순화.용Western blot검측해항체적특이성,이면역형광법학정RIP3재NIH3T3세포주중적정위,이급TNF-α화z-VAD.fmk대기정위적영향.결과:획득특이성적토항RIP3단백적항체.면역형광적결과현시,RIP3정위우세포질중.단용TNF-α혹z-VAD.fmk처리NIH3T3세포후,RIP3적정위균무명현변화;이용z-VAD.fmk화TNF-α공동처리세포후,재핵내외균유RIP3분포.결론:성공지극륭rip3기인병제비고특이성적토항RIP3항체.RIP3재NIH3T3세포주중정위우세포질중,위진일보연구RIP3재TNF-α유도적caspase비의뢰적세포조망도경중적작용전정료기출.
