结核分支杆菌HSP70原核表达载体的构建和表达及蛋白纯化
결핵분지간균HSP70원핵표체재체적구건화표체급단백순화
Construction, expression, purfication and identification of prokaryotic expression plasmid of mycobacterium tuberculosis HSP70 protein
  • 万方数据
    吉林大学学报（医学版） 길림대학학보（의학판）
    JOURNAL OF JILIN UNIVERSITY(MEDICINE EDITION)
    2006年 6期 989-992,999 ,共5页

    史洪博%段秀梅%李树蕾%许淑芬%车媛媛%刘小林%刘力华%姜艳芳%方艳秋%谭岩

    사홍박%단수매%리수뢰%허숙분%차원원%류소림%류력화%강염방%방염추%담암

    分支杆菌,结核%热休克蛋白质70%基因表达%原核细胞%蛋白质类/分离与提纯 分支桿菌,結覈%熱休剋蛋白質70%基因錶達%原覈細胞%蛋白質類/分離與提純
    분지간균,결핵%열휴극단백질70%기인표체%원핵세포%단백질류/분리여제순
    目的:构建结核分支杆菌HSP70原核表达载体并诱导其表达和纯化及鉴定目的蛋白.方法:利用PCR技术从牛型结核分支杆菌基因组中扩增出Mtb HSP70 DNA序列,构建重组质粒pGEM-Mtb HSP70,经酶切、PCR和测序鉴定后,将Mtb HSP70基因亚克隆到原核表达质粒PQE30,构建重组表达质粒PQE30-Mtb HSP70,在大肠杆菌M15中诱导表达.用镍凝胶亲和层析的方法纯化目的蛋白,Western blotting杂交鉴定纯化蛋白.结果:经测序证实,获得的目的基因与GenBank中公布的结核杆菌Mtb HSP70基因序列一致.构建的原核表达载体PQE30-Mtb HSP70在大肠杆菌M15中经1 mmol·L-1 IPTG诱导后表达出相对分子质量约为70 400的蛋白,镍柱纯化后经抗组氨酸单克隆抗体进行Western blotting,在相对分子质量约70 400处可见特异性着色带.结论:成功构建原核表达载体PQE30-Mtb HSP70,并成功诱导Mtb HSP70蛋白的表达,通过镍凝胶亲和层析法获得纯度较高的Mtb HSP70蛋白.
    목적:구건결핵분지간균HSP70원핵표체재체병유도기표체화순화급감정목적단백.방법:이용PCR기술종우형결핵분지간균기인조중확증출Mtb HSP70 DNA서렬,구건중조질립pGEM-Mtb HSP70,경매절、PCR화측서감정후,장Mtb HSP70기인아극륭도원핵표체질립PQE30,구건중조표체질립PQE30-Mtb HSP70,재대장간균M15중유도표체.용얼응효친화층석적방법순화목적단백,Western blotting잡교감정순화단백.결과:경측서증실,획득적목적기인여GenBank중공포적결핵간균Mtb HSP70기인서렬일치.구건적원핵표체재체PQE30-Mtb HSP70재대장간균M15중경1 mmol·L-1 IPTG유도후표체출상대분자질량약위70 400적단백,얼주순화후경항조안산단극륭항체진행Western blotting,재상대분자질량약70 400처가견특이성착색대.결론:성공구건원핵표체재체PQE30-Mtb HSP70,병성공유도Mtb HSP70단백적표체,통과얼응효친화층석법획득순도교고적Mtb HSP70단백.
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