CAJ | 학술논문

[目的]鉴定来源于吸水链霉菌的谷氨酰胺转胺酶基因;研究其在大肠杆菌系统的克隆与表达;分析该酶与其同源酶的活性中心氨基酸序列.[方法]从本实验室筛选的吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus;CCTCC M203062)发酵液中,分离纯化得到谷氨酰胺转胺酶酶原(pro-MTGase),测得N-端前十个氨基酸序列并与其它链霉菌来源的相应基因序列比较设计引物,扩增得到pro-MTGase 基因,将该基因插入到表达载体pET-20b(+)信号肽pelB下游,构建分泌型表达载体pET/pro-MTG,并转化不同的大肠杆菌宿主BL21(DE3)和Rosetta(DE3)pLysS.[结果]获得了pro-MTGase的完整基因序列,多重碱基序列比对表明其与S.platensis和S.caniferus的pro-MTGase基因同源性高达92%.利用Rosetta(DE3)pLysS通过降温至24℃诱导策略,获得部分胞外表达的酶原.SDS-PAGE显示,胞外表达重组蛋白的分子量约为44kDa,与吸水链霉菌表达的天然酶原相符.诱导4 h后发酵液中的重组酶原经胰蛋白酶活化为成熟酶后测得最高酶活为0.24U/mL.[结论]该研究是对吸水链霉菌的谷氨酰胺转胺酶基因的首次报道,也是国内首次利用大肠杆菌实现pro-MTGase的胞外可溶性表达.
[목적]감정래원우흡수련매균적곡안선알전알매기인;연구기재대장간균계통적극륭여표체;분석해매여기동원매적활성중심안기산서렬.[방법]종본실험실사선적흡수련매균(Streptomyces hygroscopicus;CCTCC M203062)발효액중,분리순화득도곡안선알전알매매원(pro-MTGase),측득N-단전십개안기산서렬병여기타련매균래원적상응기인서렬비교설계인물,확증득도pro-MTGase 기인,장해기인삽입도표체재체pET-20b(+)신호태pelB하유,구건분비형표체재체pET/pro-MTG,병전화불동적대장간균숙주BL21(DE3)화Rosetta(DE3)pLysS.[결과]획득료pro-MTGase적완정기인서렬,다중감기서렬비대표명기여S.platensis화S.caniferus적pro-MTGase기인동원성고체92%.이용Rosetta(DE3)pLysS통과강온지24℃유도책략,획득부분포외표체적매원.SDS-PAGE현시,포외표체중조단백적분자량약위44kDa,여흡수련매균표체적천연매원상부.유도4 h후발효액중적중조매원경이단백매활화위성숙매후측득최고매활위0.24U/mL.[결론]해연구시대흡수련매균적곡안선알전알매기인적수차보도,야시국내수차이용대장간균실현pro-MTGase적포외가용성표체.