潍坊医学院学报
濰坊醫學院學報
유방의학원학보
JOURNAL OF WEIFANG MEDICAL COLLEGE
2009年
1期
26-28,Ⅱ
,共4页
王成伟%潘新宇%冯永堂%辛%宁%鞠吉雨%苗乃法
王成偉%潘新宇%馮永堂%辛%寧%鞠吉雨%苗迺法
왕성위%반신우%풍영당%신%저%국길우%묘내법
CD252%融合蛋白%纯化%单克隆抗体%免疫原性
CD252%融閤蛋白%純化%單剋隆抗體%免疫原性
CD252%융합단백%순화%단극륭항체%면역원성
目的 优化表达含人类CD252胞外段的融合蛋白,纯化目的 蛋白,为单克隆抗体的制备打下良好的基础.方法 将测序正确的pET32a(+)-CD252胞外段重组质粒转入表达菌株BL21感受态细菌中,用SDS-PAGE电泳鉴定重组菌的诱导表达情况,通过改变pET32a(+)-CD252阳性菌株的诱导时间、温度,以优化出最佳表达条件.采用包涵体纯化法纯化目的 蛋白.用纯化的重组蛋白免疫BalB/C小鼠,采用ELISA法测定血清中抗体效价.结果 成功获得表达pET32a(+)-CD252的阳性菌株.转化有pET32a(+)-CD252胞外段重组质粒的表达菌经IPTG诱导后,在蛋白分子量标准的31.0～42.7kD之间出现了新的蛋白条带,新的蛋白主要存在于包涵体中.优化表达条件分析表明,在诱导4h、温度37℃、IPTG浓度为1.0mmol/L时,融合蛋白的表达量最高.包涵体洗涤纯化后,经SDS-PAGE电泳证明可得到较纯的目的 蛋白.免疫小鼠后测得的平均抗体效价为1∶3200.结论 pET32a(+)-CD252胞外段原核表达载体能够表达CD252蛋白,并获取了目的 蛋白的优化表达条件,表达蛋白具有良好的免疫原性.
目的 優化錶達含人類CD252胞外段的融閤蛋白,純化目的 蛋白,為單剋隆抗體的製備打下良好的基礎.方法 將測序正確的pET32a(+)-CD252胞外段重組質粒轉入錶達菌株BL21感受態細菌中,用SDS-PAGE電泳鑒定重組菌的誘導錶達情況,通過改變pET32a(+)-CD252暘性菌株的誘導時間、溫度,以優化齣最佳錶達條件.採用包涵體純化法純化目的 蛋白.用純化的重組蛋白免疫BalB/C小鼠,採用ELISA法測定血清中抗體效價.結果 成功穫得錶達pET32a(+)-CD252的暘性菌株.轉化有pET32a(+)-CD252胞外段重組質粒的錶達菌經IPTG誘導後,在蛋白分子量標準的31.0～42.7kD之間齣現瞭新的蛋白條帶,新的蛋白主要存在于包涵體中.優化錶達條件分析錶明,在誘導4h、溫度37℃、IPTG濃度為1.0mmol/L時,融閤蛋白的錶達量最高.包涵體洗滌純化後,經SDS-PAGE電泳證明可得到較純的目的 蛋白.免疫小鼠後測得的平均抗體效價為1∶3200.結論 pET32a(+)-CD252胞外段原覈錶達載體能夠錶達CD252蛋白,併穫取瞭目的 蛋白的優化錶達條件,錶達蛋白具有良好的免疫原性.
목적 우화표체함인류CD252포외단적융합단백,순화목적 단백,위단극륭항체적제비타하량호적기출.방법 장측서정학적pET32a(+)-CD252포외단중조질립전입표체균주BL21감수태세균중,용SDS-PAGE전영감정중조균적유도표체정황,통과개변pET32a(+)-CD252양성균주적유도시간、온도,이우화출최가표체조건.채용포함체순화법순화목적 단백.용순화적중조단백면역BalB/C소서,채용ELISA법측정혈청중항체효개.결과 성공획득표체pET32a(+)-CD252적양성균주.전화유pET32a(+)-CD252포외단중조질립적표체균경IPTG유도후,재단백분자량표준적31.0～42.7kD지간출현료신적단백조대,신적단백주요존재우포함체중.우화표체조건분석표명,재유도4h、온도37℃、IPTG농도위1.0mmol/L시,융합단백적표체량최고.포함체세조순화후,경SDS-PAGE전영증명가득도교순적목적 단백.면역소서후측득적평균항체효개위1∶3200.결론 pET32a(+)-CD252포외단원핵표체재체능구표체CD252단백,병획취료목적 단백적우화표체조건,표체단백구유량호적면역원성.
