CAJ | 학술논문

目的: 建立检测人RORγt(retinoid-related orphan receptor gammat) mRNA的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR, qRT-PCR)方法.方法: 根据人RORγt mRNA的保守序列设计特异性引物,提取经PMA和离子霉素刺激的人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)总RNA,并逆转录成cDNA,与pMD-18T载体连接构建质粒标准品.采用qRT-PCR方法检测RORγt mRNA水平,并评价该方法的线性、特异性及重复性.应用该方法检测Graves病(Graves′ disease, GD)患者外周血中RORγt mRNA的相对表达.结果:该方法标准曲线的相关系数为0.998,融解曲线分析显示单个峰,pMD18T-RORγt质粒标准品高、低拷贝数的批内、批间变异系数分别为6.5%,8.4%和9.6%,11.2%.初步研究表明GD患者组RORγt mRNA的相对表达水平明显高于健康对照组(t=-3.72, P<0.01).结论: 建立的检测人RORγt mRNA的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法灵敏、特异且重复性好,为临床应用提供了实验基础.
목적: 건립검측인RORγt(retinoid-related orphan receptor gammat) mRNA적SYBR GreenⅠ실시형광정량PCR(real-time fluorescence quantitative PCR, qRT-PCR)방법.방법: 근거인RORγt mRNA적보수서렬설계특이성인물,제취경PMA화리자매소자격적인외주혈단개핵세포(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)총RNA,병역전록성cDNA,여pMD-18T재체련접구건질립표준품.채용qRT-PCR방법검측RORγt mRNA수평,병평개해방법적선성、특이성급중복성.응용해방법검측Graves병(Graves′ disease, GD)환자외주혈중RORγt mRNA적상대표체.결과:해방법표준곡선적상관계수위0.998,융해곡선분석현시단개봉,pMD18T-RORγt질립표준품고、저고패수적비내、비간변이계수분별위6.5%,8.4%화9.6%,11.2%.초보연구표명GD환자조RORγt mRNA적상대표체수평명현고우건강대조조(t=-3.72, P<0.01).결론: 건립적검측인RORγt mRNA적SYBR GreenⅠ실시형광정량PCR방법령민、특이차중복성호,위림상응용제공료실험기출.