原核基因工程制备新型重组α-半乳糖苷酶应用于人B→O血型改造的研究
원핵기인공정제비신형중조α-반유당감매응용우인B→O혈형개조적연구
A Reconstructed B.Fragilis-derived Recombinant α-Galactosidase Developed for Human Blood Type B→O Conversion
  • 万方数据
    中国实验血液学杂志 중국실험혈액학잡지
    JOURNAL OF EXPERIMENTAL HEMATOLOGY
    2011年 2期 503-507 ,共5页

    高红伟%李素波%鲍国强%檀英霞%王玲燕%金泗虎%王颖丽%季守平%宫锋

    고홍위%리소파%포국강%단영하%왕령연%금사호%왕영려%계수평%궁봉

    基因重组α-半乳糖苷酶%血型改造%B→O血型改造 基因重組α-半乳糖苷酶%血型改造%B→O血型改造
    기인중조α-반유당감매%혈형개조%B→O혈형개조
    本研究利用基因工程方法制备脆弱类杆菌来源的新型α-半乳糖苷酶并将其应用于人B→O血型改造.在获得了能够表达细菌α-半乳糖苷酶工程菌株的基础上,从诱导时间、诱导剂浓度两个方面对工程菌株的诱导条件进行优化,获得细菌α-半乳糖苷酶的最佳可溶性表达条件;超声上清经过阳离子交换层析和阴离子交换层析等方法进行纯化.利用纯化后的α-半乳糖苷酶在磷酸盐缓冲液(pH 6.8)中处理B型红细胞2小时,制备O型红细胞.结果表明细菌α-半乳糖苷酶最佳诱导表达条件为:37℃、起始D(600)为0.8,IPTG浓度为0.1 mmol/L,诱导时间为2小时.纯化后α-丰乳糖苷酶的纯度为电泳纯,比活由纯化前的0.42 U/mg提高到了2.1 U/mg.该酶在26℃、接近中性的pH条件(6.8)下经2小时可将B型红细胞改造成O型红细胞,需要的酶量为225μg/ml红细胞.结论:建立了重组细菌α-半乳糖苷酶的表达纯化工艺,制备的重组α-半乳糖苷酶可有效地将B型红细胞改造成O型红细胞,为B→O血型改造提供了更有效的工具酶.
    본연구이용기인공정방법제비취약류간균래원적신형α-반유당감매병장기응용우인B→O혈형개조.재획득료능구표체세균α-반유당감매공정균주적기출상,종유도시간、유도제농도량개방면대공정균주적유도조건진행우화,획득세균α-반유당감매적최가가용성표체조건;초성상청경과양리자교환층석화음리자교환층석등방법진행순화.이용순화후적α-반유당감매재린산염완충액(pH 6.8)중처리B형홍세포2소시,제비O형홍세포.결과표명세균α-반유당감매최가유도표체조건위:37℃、기시D(600)위0.8,IPTG농도위0.1 mmol/L,유도시간위2소시.순화후α-봉유당감매적순도위전영순,비활유순화전적0.42 U/mg제고도료2.1 U/mg.해매재26℃、접근중성적pH조건(6.8)하경2소시가장B형홍세포개조성O형홍세포,수요적매량위225μg/ml홍세포.결론:건립료중조세균α-반유당감매적표체순화공예,제비적중조α-반유당감매가유효지장B형홍세포개조성O형홍세포,위B→O혈형개조제공료경유효적공구매.
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