CAJ | 학술논문

目的：构建ABH1重组蛋白原核表达载体及建立ABH1蛋白纯化技术。方法：应用PCR技术从人的cDNA文库扩增出ABH1基因片段，并加入限制性内切酶位点和终止子，进而将其插入到原核表达质粒pET-15b中，构建ABH1/15b原核表达克隆，最后用IPTG诱导其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达，用镍柱亲和纯化，离子交换层析及凝胶过滤层析三步法纯化ABH1蛋白，并采用电泳迁移率实验(EMSA)检测所纯化蛋白的DNA结合活性。结果：PCR鉴定和诱导表达阳性结果表明ABH1基因被成功构建入载体pET-15b中，测序分析显示，插入片段全长为1 189 bp，插入位点、终止位点及阅读框都完全正确。经IPTG诱导表达和纯化后，从转入ABH1/15b质粒的BL21菌株中提取并纯化了45 000的ABH1融合蛋白，经EMSA检测ABH1是一个核酸结合蛋白。结论：成功构建了重组ABH1/15b的原核表达载体，最终得到了高纯度蛋白，为进一步研究ABH1的功能和活性机制提供了实验材料。
목적：구건ABH1중조단백원핵표체재체급건립ABH1단백순화기술。방법：응용PCR기술종인적cDNA문고확증출ABH1기인편단，병가입한제성내절매위점화종지자，진이장기삽입도원핵표체질립pET-15b중，구건ABH1/15b원핵표체극륭，최후용IPTG유도기재대장간균BL21(DE3)중표체，용얼주친화순화，리자교환층석급응효과려층석삼보법순화ABH1단백，병채용전영천이솔실험(EMSA)검측소순화단백적DNA결합활성。결과：PCR감정화유도표체양성결과표명ABH1기인피성공구건입재체pET-15b중，측서분석현시，삽입편단전장위1 189 bp，삽입위점、종지위점급열독광도완전정학。경IPTG유도표체화순화후，종전입ABH1/15b질립적BL21균주중제취병순화료45 000적ABH1융합단백，경EMSA검측ABH1시일개핵산결합단백。결론：성공구건료중조ABH1/15b적원핵표체재체，최종득도료고순도단백，위진일보연구ABH1적공능화활성궤제제공료실험재료。