畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2012年
1期
105-111
,共7页
李炎鑫%马贵平%杨汉春%刘全国%史喜菊%李冰玲
李炎鑫%馬貴平%楊漢春%劉全國%史喜菊%李冰玲
리염흠%마귀평%양한춘%류전국%사희국%리빙령
牛朊蛋白%酵母Ure2p朊毒体结构域%构象转变%单克隆抗体
牛朊蛋白%酵母Ure2p朊毒體結構域%構象轉變%單剋隆抗體
우원단백%효모Ure2p원독체결구역%구상전변%단극륭항체
利用DNA重组技术将酵母Ure2p朊蛋白结构域(UPD)基因插入牛朊蛋白(BPrP)表达质粒pET-PrP中,构建原核表达载体pET-PrP-UPD.阳性质粒转化宿主菌BL21 (DE3),在IPTG诱导下获得高效表达.Westernblot检测表明表达的重组蛋白与单克隆抗体6H4呈现特异性反应,且纯化的PrP-UPD融合蛋白在体外具有聚集成淀粉样纤维、抵抗蛋白酶K消化等朊毒体的结构特点.利用纯化的PrP-UPD免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,经克隆和筛选,获得3株稳定分泌抗重组PrP单抗的杂交瘤细胞,分别命名为1G3、3A4、4D1,其中1G3分泌的单抗能识别细胞型牛朊蛋白,其Ig亚类为IgG2b,腹水ELISA效价为1×105,Western blot表明该单抗具有较强的特异性.
利用DNA重組技術將酵母Ure2p朊蛋白結構域(UPD)基因插入牛朊蛋白(BPrP)錶達質粒pET-PrP中,構建原覈錶達載體pET-PrP-UPD.暘性質粒轉化宿主菌BL21 (DE3),在IPTG誘導下穫得高效錶達.Westernblot檢測錶明錶達的重組蛋白與單剋隆抗體6H4呈現特異性反應,且純化的PrP-UPD融閤蛋白在體外具有聚集成澱粉樣纖維、牴抗蛋白酶K消化等朊毒體的結構特點.利用純化的PrP-UPD免疫BALB/c小鼠,取其脾細胞與SP2/0細胞融閤,經剋隆和篩選,穫得3株穩定分泌抗重組PrP單抗的雜交瘤細胞,分彆命名為1G3、3A4、4D1,其中1G3分泌的單抗能識彆細胞型牛朊蛋白,其Ig亞類為IgG2b,腹水ELISA效價為1×105,Western blot錶明該單抗具有較彊的特異性.
이용DNA중조기술장효모Ure2p원단백결구역(UPD)기인삽입우원단백(BPrP)표체질립pET-PrP중,구건원핵표체재체pET-PrP-UPD.양성질립전화숙주균BL21 (DE3),재IPTG유도하획득고효표체.Westernblot검측표명표체적중조단백여단극륭항체6H4정현특이성반응,차순화적PrP-UPD융합단백재체외구유취집성정분양섬유、저항단백매K소화등원독체적결구특점.이용순화적PrP-UPD면역BALB/c소서,취기비세포여SP2/0세포융합,경극륭화사선,획득3주은정분비항중조PrP단항적잡교류세포,분별명명위1G3、3A4、4D1,기중1G3분비적단항능식별세포형우원단백,기Ig아류위IgG2b,복수ELISA효개위1×105,Western blot표명해단항구유교강적특이성.
