中华微生物学和免疫学杂志
中華微生物學和免疫學雜誌
중화미생물학화면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY
2008年
12期
1116-1120
,共5页
秦莲花%范超%郑瑞娟%刘忠华%王洁%蔡江丽%胡忠义
秦蓮花%範超%鄭瑞娟%劉忠華%王潔%蔡江麗%鬍忠義
진연화%범초%정서연%류충화%왕길%채강려%호충의
简单序列重复区间%优化%遗传多样性%分枝杆菌
簡單序列重複區間%優化%遺傳多樣性%分枝桿菌
간단서렬중복구간%우화%유전다양성%분지간균
目的 构建分枝杆菌简单序列重复区间(inter-simple sequence repeat,ISSR)分型系统,为结核分枝杆菌的基因分型、菌种鉴定以及流行病学的研究提供新的研究工具和研究思路.方法 根据结核分枝杆菌基因组中简单重复序列(SSR)的丰度和频率,设计用于分枝杆菌基因分型的ISSR引物,以分枝杆菌属的DNA为材料,分析DNA浓度、Mg2+浓度、dNTP浓度、Taq酶的含量以及退火温度对ISSR-PCR扩增结果的影响,构建分枝杆菌的ISSR分型体系,并通过该体系筛选获得扩增结果稳定、多态性强的引物.结果 经过优化实验建立了分枝杆菌ISSR-PCR最佳反应体系,20 μl的PCR反应液含有的组分和终浓度分别为:10 ng模板DNA,1 U Taq酶,0.5μmol/L引物,1.5 mmol/LMgCl2,0.2 mmol/L dNTPs.利用该反应体系从10个ISSR引物中,筛选出了3个稳定性高、重复性好的引物,对分枝杆菌属28个菌种的标准菌株及52株结核分枝杆菌临床分离株进行了ISSR遗传多样性分析.结果 显示,28个分枝杆菌菌种,除了结核和牛分枝杆菌之间具有较高的相似性,两两之间存在着高度的遗传多样性;52株结核分枝杆菌菌株在用ISSR进行分型时,大部分菌株表现出了较高的遗传相似性.结论 建立了分枝杆菌属的ISSR分型体系.
目的 構建分枝桿菌簡單序列重複區間(inter-simple sequence repeat,ISSR)分型繫統,為結覈分枝桿菌的基因分型、菌種鑒定以及流行病學的研究提供新的研究工具和研究思路.方法 根據結覈分枝桿菌基因組中簡單重複序列(SSR)的豐度和頻率,設計用于分枝桿菌基因分型的ISSR引物,以分枝桿菌屬的DNA為材料,分析DNA濃度、Mg2+濃度、dNTP濃度、Taq酶的含量以及退火溫度對ISSR-PCR擴增結果的影響,構建分枝桿菌的ISSR分型體繫,併通過該體繫篩選穫得擴增結果穩定、多態性彊的引物.結果 經過優化實驗建立瞭分枝桿菌ISSR-PCR最佳反應體繫,20 μl的PCR反應液含有的組分和終濃度分彆為:10 ng模闆DNA,1 U Taq酶,0.5μmol/L引物,1.5 mmol/LMgCl2,0.2 mmol/L dNTPs.利用該反應體繫從10箇ISSR引物中,篩選齣瞭3箇穩定性高、重複性好的引物,對分枝桿菌屬28箇菌種的標準菌株及52株結覈分枝桿菌臨床分離株進行瞭ISSR遺傳多樣性分析.結果 顯示,28箇分枝桿菌菌種,除瞭結覈和牛分枝桿菌之間具有較高的相似性,兩兩之間存在著高度的遺傳多樣性;52株結覈分枝桿菌菌株在用ISSR進行分型時,大部分菌株錶現齣瞭較高的遺傳相似性.結論 建立瞭分枝桿菌屬的ISSR分型體繫.
목적 구건분지간균간단서렬중복구간(inter-simple sequence repeat,ISSR)분형계통,위결핵분지간균적기인분형、균충감정이급류행병학적연구제공신적연구공구화연구사로.방법 근거결핵분지간균기인조중간단중복서렬(SSR)적봉도화빈솔,설계용우분지간균기인분형적ISSR인물,이분지간균속적DNA위재료,분석DNA농도、Mg2+농도、dNTP농도、Taq매적함량이급퇴화온도대ISSR-PCR확증결과적영향,구건분지간균적ISSR분형체계,병통과해체계사선획득확증결과은정、다태성강적인물.결과 경과우화실험건립료분지간균ISSR-PCR최가반응체계,20 μl적PCR반응액함유적조분화종농도분별위:10 ng모판DNA,1 U Taq매,0.5μmol/L인물,1.5 mmol/LMgCl2,0.2 mmol/L dNTPs.이용해반응체계종10개ISSR인물중,사선출료3개은정성고、중복성호적인물,대분지간균속28개균충적표준균주급52주결핵분지간균림상분리주진행료ISSR유전다양성분석.결과 현시,28개분지간균균충,제료결핵화우분지간균지간구유교고적상사성,량량지간존재착고도적유전다양성;52주결핵분지간균균주재용ISSR진행분형시,대부분균주표현출료교고적유전상사성.결론 건립료분지간균속적ISSR분형체계.
