中华微生物学和免疫学杂志
中華微生物學和免疫學雜誌
중화미생물학화면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY
2002年
2期
156-159
,共4页
杨玲%于孟学%尹宏恩%林嘉友%高杨%何夏秀
楊玲%于孟學%尹宏恩%林嘉友%高楊%何夏秀
양령%우맹학%윤굉은%림가우%고양%하하수
异质性胞核核糖核蛋白A2%基因表达%ELISA
異質性胞覈覈糖覈蛋白A2%基因錶達%ELISA
이질성포핵핵당핵단백A2%기인표체%ELISA
目的构建含异质性胞核核糖核蛋白A2 (hnRNP A2) cDNA片段的基因克隆,制备并纯化重组蛋白hnRNP A2,用以检测抗hnRNP A2/RA33的抗体.方法从人外周血单个核细胞提取细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增hnRNP A2 cDNA,将其克隆于pUC-T1质粒中,测定其序列.构建高效表达载体pET28a-hnRNP A2,转化大肠杆菌BL21(DE3)plys S并进行诱导表达,将含目的蛋白的组分经金属螯合树脂亲和层析柱进行蛋白纯化.以该纯化蛋白为包被抗原,ELISA方法检测类风湿关节炎(RA) 97例、系统性红斑狼疮(SLE)50例、混合性结缔组织病(MCTD)8例、其他关节炎29例、其他弥漫性结缔组织病(CTD)99例.结果构建hnRNP A2重组表达载体并在大肠杆菌中获得hnRNP A2高效表达;在RA、SLE、MCTD、其他关节炎、其他CTD患者中抗hnRNP A2/RA33抗体阳性率分别为36.8%、24%、75%、3.75%、10.10%;在RA中特异性为86.67%.结论以纯化的基因重组蛋白hnRNP A2为抗原检测hnRNP A2/RA33抗体是早期诊断RA的可靠方法.
目的構建含異質性胞覈覈糖覈蛋白A2 (hnRNP A2) cDNA片段的基因剋隆,製備併純化重組蛋白hnRNP A2,用以檢測抗hnRNP A2/RA33的抗體.方法從人外週血單箇覈細胞提取細胞總RNA,應用RT-PCR方法擴增hnRNP A2 cDNA,將其剋隆于pUC-T1質粒中,測定其序列.構建高效錶達載體pET28a-hnRNP A2,轉化大腸桿菌BL21(DE3)plys S併進行誘導錶達,將含目的蛋白的組分經金屬螯閤樹脂親和層析柱進行蛋白純化.以該純化蛋白為包被抗原,ELISA方法檢測類風濕關節炎(RA) 97例、繫統性紅斑狼瘡(SLE)50例、混閤性結締組織病(MCTD)8例、其他關節炎29例、其他瀰漫性結締組織病(CTD)99例.結果構建hnRNP A2重組錶達載體併在大腸桿菌中穫得hnRNP A2高效錶達;在RA、SLE、MCTD、其他關節炎、其他CTD患者中抗hnRNP A2/RA33抗體暘性率分彆為36.8%、24%、75%、3.75%、10.10%;在RA中特異性為86.67%.結論以純化的基因重組蛋白hnRNP A2為抗原檢測hnRNP A2/RA33抗體是早期診斷RA的可靠方法.
목적구건함이질성포핵핵당핵단백A2 (hnRNP A2) cDNA편단적기인극륭,제비병순화중조단백hnRNP A2,용이검측항hnRNP A2/RA33적항체.방법종인외주혈단개핵세포제취세포총RNA,응용RT-PCR방법확증hnRNP A2 cDNA,장기극륭우pUC-T1질립중,측정기서렬.구건고효표체재체pET28a-hnRNP A2,전화대장간균BL21(DE3)plys S병진행유도표체,장함목적단백적조분경금속오합수지친화층석주진행단백순화.이해순화단백위포피항원,ELISA방법검측류풍습관절염(RA) 97례、계통성홍반랑창(SLE)50례、혼합성결체조직병(MCTD)8례、기타관절염29례、기타미만성결체조직병(CTD)99례.결과구건hnRNP A2중조표체재체병재대장간균중획득hnRNP A2고효표체;재RA、SLE、MCTD、기타관절염、기타CTD환자중항hnRNP A2/RA33항체양성솔분별위36.8%、24%、75%、3.75%、10.10%;재RA중특이성위86.67%.결론이순화적기인중조단백hnRNP A2위항원검측hnRNP A2/RA33항체시조기진단RA적가고방법.
