中华实验和临床病毒学杂志
中華實驗和臨床病毒學雜誌
중화실험화림상병독학잡지
CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL AND CLINICAL VIROLOGY
2005年
3期
275-278
,共4页
梅亚波%廖志勇%王压娣%张丽娅%徐华%YUEN Kwok-yung%车小燕
梅亞波%廖誌勇%王壓娣%張麗婭%徐華%YUEN Kwok-yung%車小燕
매아파%료지용%왕압제%장려아%서화%YUEN Kwok-yung%차소연
严重急性呼吸综合征%冠状病毒属%蛋白质S%免疫活性
嚴重急性呼吸綜閤徵%冠狀病毒屬%蛋白質S%免疫活性
엄중급성호흡종합정%관상병독속%단백질S%면역활성
目的构建SARS冠状病毒(SARS-CoV)棘突(spike)蛋白(S蛋白)S1区基因(40～2001 bp)分段表达载体,并研究其免疫原性.方法利用PCR技术扩增S1区基因,将其定向插入pQE-30质粒,在pQE-30质粒上将S1切成3段(40～751、746～1344、746～2001 bp),均插入pQE-30质粒,构建质粒在大肠埃希菌M15中表达,表达产物经亲和层析纯化及Western Blot和ELISA鉴定.结果构建的3种重组质粒(pQE-30/S1a、pQE-30/S1b、pQE-30/S1c)均高效表达,重组蛋白相对分子质量分别为26 700、22 500和46 000,表达量分别占菌体总蛋白质的35%、35%和30%.3种重组蛋白经Ni亲和层析树脂得到成功纯化.经Western Blot及ELISA证实,重组蛋白片段S1c(746～2001bp)可以被SARS患者血清所识别.结论成功构建了SARS-CoV S蛋白S1区基因分段表达载体,重组蛋白S1c具有较强的免疫原性,它的获得为下一步疫苗的研制奠定了基础.
目的構建SARS冠狀病毒(SARS-CoV)棘突(spike)蛋白(S蛋白)S1區基因(40～2001 bp)分段錶達載體,併研究其免疫原性.方法利用PCR技術擴增S1區基因,將其定嚮插入pQE-30質粒,在pQE-30質粒上將S1切成3段(40～751、746～1344、746～2001 bp),均插入pQE-30質粒,構建質粒在大腸埃希菌M15中錶達,錶達產物經親和層析純化及Western Blot和ELISA鑒定.結果構建的3種重組質粒(pQE-30/S1a、pQE-30/S1b、pQE-30/S1c)均高效錶達,重組蛋白相對分子質量分彆為26 700、22 500和46 000,錶達量分彆佔菌體總蛋白質的35%、35%和30%.3種重組蛋白經Ni親和層析樹脂得到成功純化.經Western Blot及ELISA證實,重組蛋白片段S1c(746～2001bp)可以被SARS患者血清所識彆.結論成功構建瞭SARS-CoV S蛋白S1區基因分段錶達載體,重組蛋白S1c具有較彊的免疫原性,它的穫得為下一步疫苗的研製奠定瞭基礎.
목적구건SARS관상병독(SARS-CoV)극돌(spike)단백(S단백)S1구기인(40～2001 bp)분단표체재체,병연구기면역원성.방법이용PCR기술확증S1구기인,장기정향삽입pQE-30질립,재pQE-30질립상장S1절성3단(40～751、746～1344、746～2001 bp),균삽입pQE-30질립,구건질립재대장애희균M15중표체,표체산물경친화층석순화급Western Blot화ELISA감정.결과구건적3충중조질립(pQE-30/S1a、pQE-30/S1b、pQE-30/S1c)균고효표체,중조단백상대분자질량분별위26 700、22 500화46 000,표체량분별점균체총단백질적35%、35%화30%.3충중조단백경Ni친화층석수지득도성공순화.경Western Blot급ELISA증실,중조단백편단S1c(746～2001bp)가이피SARS환자혈청소식별.결론성공구건료SARS-CoV S단백S1구기인분단표체재체,중조단백S1c구유교강적면역원성,타적획득위하일보역묘적연제전정료기출.
