中华皮肤科杂志
中華皮膚科雜誌
중화피부과잡지
Chinese Journal of Dermatology
2006年
7期
381-384
,共4页
朱明姬%姜日花%金东成%金昌德%李增勋
硃明姬%薑日花%金東成%金昌德%李增勛
주명희%강일화%금동성%금창덕%리증훈
成纤维细胞%基因文库%神经鞘氨醇磷酸胆碱%抑制性消减杂交
成纖維細胞%基因文庫%神經鞘氨醇燐痠膽堿%抑製性消減雜交
성섬유세포%기인문고%신경초안순린산담감%억제성소감잡교
目的利用抑制性消减杂交(SSH)技术构建神经鞘氨醇磷酸胆碱(SPC)对人真皮成纤维细胞的差异表达cDNA消减杂交文库,从中克隆出差异表达基因.方法原代培养人皮肤成纤维细胞;提取经SPC处理和未处理的成纤维细胞总RNA,合成cDNA,进行2次消减杂交及2次抑制性PCR,将产物与T/A载体连接,构建SPC作用于人真皮成纤维细胞的差异表达cDNA消减杂交文库,用RNA印迹验证阳性克隆,测序并登陆基因库寻找同源性基因.结果成功构建了SPC作用于人真皮成纤维细胞的差异表达cDNA文库;从实验组筛查的28个差异表达克隆中确定了6个差异表达基因,其中已知基因5个、新基因1个,分别为基质金属蛋白酶2,血小板反应蛋白1,催产素受体,锌指转录因子,铁传递蛋白受体等.结论神经鞘氨醇磷酸胆碱可上调人真皮成纤维细胞基质金属蛋白酶、血小板反应蛋白1、催产素受体、锌指转录因子、铁传递蛋白受体等基因表达.
目的利用抑製性消減雜交(SSH)技術構建神經鞘氨醇燐痠膽堿(SPC)對人真皮成纖維細胞的差異錶達cDNA消減雜交文庫,從中剋隆齣差異錶達基因.方法原代培養人皮膚成纖維細胞;提取經SPC處理和未處理的成纖維細胞總RNA,閤成cDNA,進行2次消減雜交及2次抑製性PCR,將產物與T/A載體連接,構建SPC作用于人真皮成纖維細胞的差異錶達cDNA消減雜交文庫,用RNA印跡驗證暘性剋隆,測序併登陸基因庫尋找同源性基因.結果成功構建瞭SPC作用于人真皮成纖維細胞的差異錶達cDNA文庫;從實驗組篩查的28箇差異錶達剋隆中確定瞭6箇差異錶達基因,其中已知基因5箇、新基因1箇,分彆為基質金屬蛋白酶2,血小闆反應蛋白1,催產素受體,鋅指轉錄因子,鐵傳遞蛋白受體等.結論神經鞘氨醇燐痠膽堿可上調人真皮成纖維細胞基質金屬蛋白酶、血小闆反應蛋白1、催產素受體、鋅指轉錄因子、鐵傳遞蛋白受體等基因錶達.
목적이용억제성소감잡교(SSH)기술구건신경초안순린산담감(SPC)대인진피성섬유세포적차이표체cDNA소감잡교문고,종중극륭출차이표체기인.방법원대배양인피부성섬유세포;제취경SPC처리화미처리적성섬유세포총RNA,합성cDNA,진행2차소감잡교급2차억제성PCR,장산물여T/A재체련접,구건SPC작용우인진피성섬유세포적차이표체cDNA소감잡교문고,용RNA인적험증양성극륭,측서병등륙기인고심조동원성기인.결과성공구건료SPC작용우인진피성섬유세포적차이표체cDNA문고;종실험조사사적28개차이표체극륭중학정료6개차이표체기인,기중이지기인5개、신기인1개,분별위기질금속단백매2,혈소판반응단백1,최산소수체,자지전록인자,철전체단백수체등.결론신경초안순린산담감가상조인진피성섬유세포기질금속단백매、혈소판반응단백1、최산소수체、자지전록인자、철전체단백수체등기인표체.
