安徽医科大学学报
安徽醫科大學學報
안휘의과대학학보
ACTA UNIVERSITY MEDICINALIS ANHUI
2012年
11期
1283-1287
,共5页
王志成%罗梅宏%夏菁%王国华%张晓峰
王誌成%囉梅宏%夏菁%王國華%張曉峰
왕지성%라매굉%하정%왕국화%장효봉
血小板%凝血酶%活性氧%GPIbα酶切
血小闆%凝血酶%活性氧%GPIbα酶切
혈소판%응혈매%활성양%GPIbα매절
目的 探讨凝血酶诱导糖蛋白(GP)Ibα酶切的分子机制.方法 取健康志愿者静脉血,分离得到洗涤血小板.洗涤血小板分别与钙离子依赖蛋白酶(calpain)抑制剂、活性氧(ROS)抑制剂、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶抑制剂、线粒体靶向的ROS抑制剂、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)抑制剂、前列腺素E1(PGE1)、解离素-金属蛋白酶17(ADAM17)抑制剂或溶剂对照等预孵育,再与凝血酶(在搅拌或非搅拌条件下)孵育.流式细胞仪检测ROS浓度,Western blot检测GPIbα的酶切和calpain底物talin的酶切.结果 ROS抑制剂二硫苏糖醇(DTT)和calpain抑制剂MDL单独使用时,均部分抑制凝血酶(搅拌条件下)诱导的GPIbα酶切;联合使用时,则完全抑制凝血酶(搅拌条件下)诱导的GPIbα酶切.DTT完全抑制凝血酶(非搅拌条件下)诱导的GPIbα酶切,而MDL没有抑制作用.另外,caspase抑制剂和血小板活化抑制剂(PGE1)不抑制凝血酶诱导的GPIbα酶切.凝血酶(非搅拌条件下)剂量依赖地引起血小板ROS浓度升高;NAD(P)H氧化酶抑制剂抑制凝血酶引起的ROS浓度升高,线粒体靶向的ROS抑制剂则没有抑制作用.结论 在搅拌条件下,ROS和calpain两条信号通路共同调控凝血酶诱导的GPIbα酶切;在非搅拌条件下,通过NAD(P)H氧化酶产生的ROS调控凝血酶诱导的GPIbα酶切.
目的 探討凝血酶誘導糖蛋白(GP)Ibα酶切的分子機製.方法 取健康誌願者靜脈血,分離得到洗滌血小闆.洗滌血小闆分彆與鈣離子依賴蛋白酶(calpain)抑製劑、活性氧(ROS)抑製劑、還原型煙酰胺腺嘌呤二覈苷痠燐痠(NADPH)氧化酶抑製劑、線粒體靶嚮的ROS抑製劑、含半胱氨痠的天鼕氨痠蛋白水解酶(caspase)抑製劑、前列腺素E1(PGE1)、解離素-金屬蛋白酶17(ADAM17)抑製劑或溶劑對照等預孵育,再與凝血酶(在攪拌或非攪拌條件下)孵育.流式細胞儀檢測ROS濃度,Western blot檢測GPIbα的酶切和calpain底物talin的酶切.結果 ROS抑製劑二硫囌糖醇(DTT)和calpain抑製劑MDL單獨使用時,均部分抑製凝血酶(攪拌條件下)誘導的GPIbα酶切;聯閤使用時,則完全抑製凝血酶(攪拌條件下)誘導的GPIbα酶切.DTT完全抑製凝血酶(非攪拌條件下)誘導的GPIbα酶切,而MDL沒有抑製作用.另外,caspase抑製劑和血小闆活化抑製劑(PGE1)不抑製凝血酶誘導的GPIbα酶切.凝血酶(非攪拌條件下)劑量依賴地引起血小闆ROS濃度升高;NAD(P)H氧化酶抑製劑抑製凝血酶引起的ROS濃度升高,線粒體靶嚮的ROS抑製劑則沒有抑製作用.結論 在攪拌條件下,ROS和calpain兩條信號通路共同調控凝血酶誘導的GPIbα酶切;在非攪拌條件下,通過NAD(P)H氧化酶產生的ROS調控凝血酶誘導的GPIbα酶切.
목적 탐토응혈매유도당단백(GP)Ibα매절적분자궤제.방법 취건강지원자정맥혈,분리득도세조혈소판.세조혈소판분별여개리자의뢰단백매(calpain)억제제、활성양(ROS)억제제、환원형연선알선표령이핵감산린산(NADPH)양화매억제제、선립체파향적ROS억제제、함반광안산적천동안산단백수해매(caspase)억제제、전렬선소E1(PGE1)、해리소-금속단백매17(ADAM17)억제제혹용제대조등예부육,재여응혈매(재교반혹비교반조건하)부육.류식세포의검측ROS농도,Western blot검측GPIbα적매절화calpain저물talin적매절.결과 ROS억제제이류소당순(DTT)화calpain억제제MDL단독사용시,균부분억제응혈매(교반조건하)유도적GPIbα매절;연합사용시,칙완전억제응혈매(교반조건하)유도적GPIbα매절.DTT완전억제응혈매(비교반조건하)유도적GPIbα매절,이MDL몰유억제작용.령외,caspase억제제화혈소판활화억제제(PGE1)불억제응혈매유도적GPIbα매절.응혈매(비교반조건하)제량의뢰지인기혈소판ROS농도승고;NAD(P)H양화매억제제억제응혈매인기적ROS농도승고,선립체파향적ROS억제제칙몰유억제작용.결론 재교반조건하,ROS화calpain량조신호통로공동조공응혈매유도적GPIbα매절;재비교반조건하,통과NAD(P)H양화매산생적ROS조공응혈매유도적GPIbα매절.
