中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2011年
28期
5285-5289
,共5页
王爱丽%吴志宏%徐顺%顾耀辉%黄静%陈波%贾卿
王愛麗%吳誌宏%徐順%顧耀輝%黃靜%陳波%賈卿
왕애려%오지굉%서순%고요휘%황정%진파%가경
小分子RNA%RNA干扰%Smad3%表达载体%构建%基因沉默
小分子RNA%RNA榦擾%Smad3%錶達載體%構建%基因沉默
소분자RNA%RNA간우%Smad3%표체재체%구건%기인침묵
背景:研究提示抑制Smad3可望抑制纤维增生和胶原的大量产生.目的:构建针对Smad3基因的siRNA表达载体,观察RNA干扰对增生性瘢痕成纤维细胞Smad3基因表达的抑制作用.方法:根据siRNA设计原则,设计3条针对Smad3基因的siRNA靶序列,分别合成两条互补的寡核苷酸链,退火后与载体pRNAT-U6连接,然后进行酶切鉴定和DNA序列测定.用脂质体包裹转染增生性瘢痕成纤维细胞,荧光定量PCR和Western blot方法检测Smad3基因的表达情况.结果与结论:测序分析结果显示:克隆入pRNAT-U6载体的针对Smad3基因的siRNA的双链寡核苷酸片段插入正确;荧光定量PCR和Western blot检测显示:转染的增生性瘢痕成纤维细胞Smad3基因的表达水平明显降低,尤以AGA CAG ACT GTG ACC AGT A(1156)为靶序列的siRNA沉默作用最强,抑制效率于转染后48 h可达45%.证实实验构建的沉默增生性瘢痕成纤维细胞Smad3基因表达的siRNA载体获得成功.
揹景:研究提示抑製Smad3可望抑製纖維增生和膠原的大量產生.目的:構建針對Smad3基因的siRNA錶達載體,觀察RNA榦擾對增生性瘢痕成纖維細胞Smad3基因錶達的抑製作用.方法:根據siRNA設計原則,設計3條針對Smad3基因的siRNA靶序列,分彆閤成兩條互補的寡覈苷痠鏈,退火後與載體pRNAT-U6連接,然後進行酶切鑒定和DNA序列測定.用脂質體包裹轉染增生性瘢痕成纖維細胞,熒光定量PCR和Western blot方法檢測Smad3基因的錶達情況.結果與結論:測序分析結果顯示:剋隆入pRNAT-U6載體的針對Smad3基因的siRNA的雙鏈寡覈苷痠片段插入正確;熒光定量PCR和Western blot檢測顯示:轉染的增生性瘢痕成纖維細胞Smad3基因的錶達水平明顯降低,尤以AGA CAG ACT GTG ACC AGT A(1156)為靶序列的siRNA沉默作用最彊,抑製效率于轉染後48 h可達45%.證實實驗構建的沉默增生性瘢痕成纖維細胞Smad3基因錶達的siRNA載體穫得成功.
배경:연구제시억제Smad3가망억제섬유증생화효원적대양산생.목적:구건침대Smad3기인적siRNA표체재체,관찰RNA간우대증생성반흔성섬유세포Smad3기인표체적억제작용.방법:근거siRNA설계원칙,설계3조침대Smad3기인적siRNA파서렬,분별합성량조호보적과핵감산련,퇴화후여재체pRNAT-U6련접,연후진행매절감정화DNA서렬측정.용지질체포과전염증생성반흔성섬유세포,형광정량PCR화Western blot방법검측Smad3기인적표체정황.결과여결론:측서분석결과현시:극륭입pRNAT-U6재체적침대Smad3기인적siRNA적쌍련과핵감산편단삽입정학;형광정량PCR화Western blot검측현시:전염적증생성반흔성섬유세포Smad3기인적표체수평명현강저,우이AGA CAG ACT GTG ACC AGT A(1156)위파서렬적siRNA침묵작용최강,억제효솔우전염후48 h가체45%.증실실험구건적침묵증생성반흔성섬유세포Smad3기인표체적siRNA재체획득성공.
