陕西医学杂志
陝西醫學雜誌
협서의학잡지
SHAANXI MEDICAL JOURNAL
2011年
10期
1281-1284
,共4页
饶国洲%李昂%朱永进%齐红%张引成
饒國洲%李昂%硃永進%齊紅%張引成
요국주%리앙%주영진%제홍%장인성
RNA干扰%基因,bcl-2%@慢病毒表达载体
RNA榦擾%基因,bcl-2%@慢病毒錶達載體
RNA간우%기인,bcl-2%@만병독표체재체
目的:应用分子克隆技术,针对人bcl-2目的基因设计3个siRNA靶点和一个阴性对照序列,构建4对shRNA重组慢病毒表达载体,并进行测序验证鉴定.方法:以设计的有效靶序列进行引物合成,将单链引物退火成双链oligo序列,连接入经Age Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切线性化的慢病毒RNA干扰载体中,经转化DH5α感受态细胞并筛选出阳性转化子,采用PCR扩增和DNA测序分别鉴定阳性克隆.结果:PCR扩增产物经凝胶电泳后阳性克隆得到335bp条带,阴性克隆得到298 bp条带,DNA测序结果证实其含有设计合成序列.结论:成功构建4对bcl-2shRNA重组慢病毒表达载体,为研究靶向bcl-2 siRNA对肿瘤细胞增殖抑制与诱导凋亡作用及基因治疗研究奠定了实验基础.
目的:應用分子剋隆技術,針對人bcl-2目的基因設計3箇siRNA靶點和一箇陰性對照序列,構建4對shRNA重組慢病毒錶達載體,併進行測序驗證鑒定.方法:以設計的有效靶序列進行引物閤成,將單鏈引物退火成雙鏈oligo序列,連接入經Age Ⅰ和EcoR Ⅰ雙酶切線性化的慢病毒RNA榦擾載體中,經轉化DH5α感受態細胞併篩選齣暘性轉化子,採用PCR擴增和DNA測序分彆鑒定暘性剋隆.結果:PCR擴增產物經凝膠電泳後暘性剋隆得到335bp條帶,陰性剋隆得到298 bp條帶,DNA測序結果證實其含有設計閤成序列.結論:成功構建4對bcl-2shRNA重組慢病毒錶達載體,為研究靶嚮bcl-2 siRNA對腫瘤細胞增殖抑製與誘導凋亡作用及基因治療研究奠定瞭實驗基礎.
목적:응용분자극륭기술,침대인bcl-2목적기인설계3개siRNA파점화일개음성대조서렬,구건4대shRNA중조만병독표체재체,병진행측서험증감정.방법:이설계적유효파서렬진행인물합성,장단련인물퇴화성쌍련oligo서렬,련접입경Age Ⅰ화EcoR Ⅰ쌍매절선성화적만병독RNA간우재체중,경전화DH5α감수태세포병사선출양성전화자,채용PCR확증화DNA측서분별감정양성극륭.결과:PCR확증산물경응효전영후양성극륭득도335bp조대,음성극륭득도298 bp조대,DNA측서결과증실기함유설계합성서렬.결론:성공구건4대bcl-2shRNA중조만병독표체재체,위연구파향bcl-2 siRNA대종류세포증식억제여유도조망작용급기인치료연구전정료실험기출.
