中山大学学报（自然科学版）
中山大學學報（自然科學版）
중산대학학보（자연과학판）
ACTA SCIENTIARUM NATURALIUM UNIVERSITATIS SUNYATSENI
2011年
1期
110-114
,共5页
夏立群%张红莲%梁海鹰%秦启伟
夏立群%張紅蓮%樑海鷹%秦啟偉
하립군%장홍련%량해응%진계위
RNA干扰%绿色荧光蛋白%石斑鱼虹彩病毒SGIV%ICP18
RNA榦擾%綠色熒光蛋白%石斑魚虹綵病毒SGIV%ICP18
RNA간우%록색형광단백%석반어홍채병독SGIV%ICP18
将含有新加坡石斑鱼虹彩病毒(Singapore gmuper iridovirus,SGIV)ICP18基因的真核表达载体pEGFP-ICPl8转染到胖头鲤细胞(Fathead minnow cells,FHM)中进行融合表达,用荧光显微镜观察到ICP18-GFP融合蛋白呈点状分布于FHM细胞的细胞质中.根据SGIV ICPl8的序列,设计并体外化学合成了特异性干扰SGIVICP18的siRNA(siRNA-ICP18),与pEGFP-ICP18共转染到FHM细胞中,通过荧光显微镜观察不同时间点的荧光强度变化.与序列非特异性siRNA(siRNA-negative)阴性对照相比,转染后24-48 h,共转染siRNA-ICP18和pEGFP-ICP18的实验细胞中发荧光的细胞数量较阴性对照少60%-80%左右,说明体外化学合成的siRNA-ICP18可有效抑制FHM细胞中外源导入SGIV ICP18基因的表达.
將含有新加坡石斑魚虹綵病毒(Singapore gmuper iridovirus,SGIV)ICP18基因的真覈錶達載體pEGFP-ICPl8轉染到胖頭鯉細胞(Fathead minnow cells,FHM)中進行融閤錶達,用熒光顯微鏡觀察到ICP18-GFP融閤蛋白呈點狀分佈于FHM細胞的細胞質中.根據SGIV ICPl8的序列,設計併體外化學閤成瞭特異性榦擾SGIVICP18的siRNA(siRNA-ICP18),與pEGFP-ICP18共轉染到FHM細胞中,通過熒光顯微鏡觀察不同時間點的熒光彊度變化.與序列非特異性siRNA(siRNA-negative)陰性對照相比,轉染後24-48 h,共轉染siRNA-ICP18和pEGFP-ICP18的實驗細胞中髮熒光的細胞數量較陰性對照少60%-80%左右,說明體外化學閤成的siRNA-ICP18可有效抑製FHM細胞中外源導入SGIV ICP18基因的錶達.
장함유신가파석반어홍채병독(Singapore gmuper iridovirus,SGIV)ICP18기인적진핵표체재체pEGFP-ICPl8전염도반두리세포(Fathead minnow cells,FHM)중진행융합표체,용형광현미경관찰도ICP18-GFP융합단백정점상분포우FHM세포적세포질중.근거SGIV ICPl8적서렬,설계병체외화학합성료특이성간우SGIVICP18적siRNA(siRNA-ICP18),여pEGFP-ICP18공전염도FHM세포중,통과형광현미경관찰불동시간점적형광강도변화.여서렬비특이성siRNA(siRNA-negative)음성대조상비,전염후24-48 h,공전염siRNA-ICP18화pEGFP-ICP18적실험세포중발형광적세포수량교음성대조소60%-80%좌우,설명체외화학합성적siRNA-ICP18가유효억제FHM세포중외원도입SGIV ICP18기인적표체.
