神经损伤与功能重建
神經損傷與功能重建
신경손상여공능중건
NEURAL INJURY AND FUNCTIONAL RECONSTRUCTION
2009年
5期
324-328
,共5页
酸敏感离子通道%组织型激肽释放酶%相互作用%重组质粒
痠敏感離子通道%組織型激肽釋放酶%相互作用%重組質粒
산민감리자통도%조직형격태석방매%상호작용%중조질립
目的:观察酸敏感离子通道蛋白(ASIC1a、ASIC2a)与组织型激肽释放酶(TK)之间是否存在相互作用. 方法:RT-PCR分别获得小鼠TK、ASIC1a、ASIC2a全长cDNA,将其克隆入真核表达载体pcDNA3.1/Myc-his中,脂质体法分别将pcDNA3.1-TK和pcDNA3.1-ASIC1a、pcDNA3.1-TK和pcDNA3.1-ASIC2a共转染至人胚胎肾细胞(HEK293T),免疫共沉淀分别用抗Myc及抗TK抗体观察两者间有无相互作用.将ASICs融合蛋白与TK(100 μg/mL)共孵育,SDS-PAGE分别用抗Myc及抗TK抗体检测蛋白表达. 结果:pcDNA3.1-TK和pcDNA3.1-ASIC1a、pcDNA3.1-TK和pcDNA3.1-ASIC2a共转染后,SDS-PAGE显示抗TK抗体检测后在转染细胞内见有56 kDa 的TK条带出现,但抗Myc抗体作用未见ASICs目的条带出现.纯化的ASIC1a、ASIC2a融合蛋白与TK共孵育后,SDS-PAGE显示抗Myc抗体检测后在约66 kDa处有融合蛋白表达条带,但抗TK抗体检测后在56 kDa处无条带出现.结论: TK与ASIC1a、TK与ASIC2a之间无相互作用.
目的:觀察痠敏感離子通道蛋白(ASIC1a、ASIC2a)與組織型激肽釋放酶(TK)之間是否存在相互作用. 方法:RT-PCR分彆穫得小鼠TK、ASIC1a、ASIC2a全長cDNA,將其剋隆入真覈錶達載體pcDNA3.1/Myc-his中,脂質體法分彆將pcDNA3.1-TK和pcDNA3.1-ASIC1a、pcDNA3.1-TK和pcDNA3.1-ASIC2a共轉染至人胚胎腎細胞(HEK293T),免疫共沉澱分彆用抗Myc及抗TK抗體觀察兩者間有無相互作用.將ASICs融閤蛋白與TK(100 μg/mL)共孵育,SDS-PAGE分彆用抗Myc及抗TK抗體檢測蛋白錶達. 結果:pcDNA3.1-TK和pcDNA3.1-ASIC1a、pcDNA3.1-TK和pcDNA3.1-ASIC2a共轉染後,SDS-PAGE顯示抗TK抗體檢測後在轉染細胞內見有56 kDa 的TK條帶齣現,但抗Myc抗體作用未見ASICs目的條帶齣現.純化的ASIC1a、ASIC2a融閤蛋白與TK共孵育後,SDS-PAGE顯示抗Myc抗體檢測後在約66 kDa處有融閤蛋白錶達條帶,但抗TK抗體檢測後在56 kDa處無條帶齣現.結論: TK與ASIC1a、TK與ASIC2a之間無相互作用.
목적:관찰산민감리자통도단백(ASIC1a、ASIC2a)여조직형격태석방매(TK)지간시부존재상호작용. 방법:RT-PCR분별획득소서TK、ASIC1a、ASIC2a전장cDNA,장기극륭입진핵표체재체pcDNA3.1/Myc-his중,지질체법분별장pcDNA3.1-TK화pcDNA3.1-ASIC1a、pcDNA3.1-TK화pcDNA3.1-ASIC2a공전염지인배태신세포(HEK293T),면역공침정분별용항Myc급항TK항체관찰량자간유무상호작용.장ASICs융합단백여TK(100 μg/mL)공부육,SDS-PAGE분별용항Myc급항TK항체검측단백표체. 결과:pcDNA3.1-TK화pcDNA3.1-ASIC1a、pcDNA3.1-TK화pcDNA3.1-ASIC2a공전염후,SDS-PAGE현시항TK항체검측후재전염세포내견유56 kDa 적TK조대출현,단항Myc항체작용미견ASICs목적조대출현.순화적ASIC1a、ASIC2a융합단백여TK공부육후,SDS-PAGE현시항Myc항체검측후재약66 kDa처유융합단백표체조대,단항TK항체검측후재56 kDa처무조대출현.결론: TK여ASIC1a、TK여ASIC2a지간무상호작용.
