检验检疫学刊
檢驗檢疫學刊
검험검역학간
INSPECTION AND QUARANTINE SCIENCE
2009年
3期
17-21
,共5页
可见光%基因芯片%食源性致病菌%检测
可見光%基因芯片%食源性緻病菌%檢測
가견광%기인심편%식원성치병균%검측
[目的]利用可见光基因芯片技术,针对12种常见食源性致病菌,建立快速、准确、高通量的诊断方法.[方法]设计靶细菌16s rDNA和23s rDNA的通用引物,反向引物5'端标记生物素;特异寡核苷酸探针设计在两对引物之间的可变区,5'端标记氨基基团.将探针点样于固相载体制备基因芯片,优化PCR反应体系后,PCR产物与芯片点制探针区域进行杂交,然后通过化学显色直接观察结果,并评价反应体系的特异性、灵敏度、重复性等指标.收集临床样本28例,同时制备双盲模拟污染样本10例,对检测方法进一步评价.[结果]:本试验所建立的基因芯片方法可同时检测志贺菌、耶尔森氏菌、沙门菌、腊样芽孢杆菌、空肠弯曲菌、金黄色葡萄球菌、霍乱弧菌、副溶血性弧菌、单增李氏菌、布鲁氏菌、变形杆菌、肠出血性大肠杆菌O157:H7等12种食源性致病菌,特异性高,操作简便;针对纯培养食源性致病菌反应体系的灵敏度为103 cfu/mL,模拟样本的灵敏度为104 cfu/mL;重复性好;采用可见光基因芯片方法检测28例临床样本,26例与常规培养方法结果完全一致,符合率达到92.9%;双盲模拟样本的检测符合率达到100%.
[目的]利用可見光基因芯片技術,針對12種常見食源性緻病菌,建立快速、準確、高通量的診斷方法.[方法]設計靶細菌16s rDNA和23s rDNA的通用引物,反嚮引物5'耑標記生物素;特異寡覈苷痠探針設計在兩對引物之間的可變區,5'耑標記氨基基糰.將探針點樣于固相載體製備基因芯片,優化PCR反應體繫後,PCR產物與芯片點製探針區域進行雜交,然後通過化學顯色直接觀察結果,併評價反應體繫的特異性、靈敏度、重複性等指標.收集臨床樣本28例,同時製備雙盲模擬汙染樣本10例,對檢測方法進一步評價.[結果]:本試驗所建立的基因芯片方法可同時檢測誌賀菌、耶爾森氏菌、沙門菌、臘樣芽孢桿菌、空腸彎麯菌、金黃色葡萄毬菌、霍亂弧菌、副溶血性弧菌、單增李氏菌、佈魯氏菌、變形桿菌、腸齣血性大腸桿菌O157:H7等12種食源性緻病菌,特異性高,操作簡便;針對純培養食源性緻病菌反應體繫的靈敏度為103 cfu/mL,模擬樣本的靈敏度為104 cfu/mL;重複性好;採用可見光基因芯片方法檢測28例臨床樣本,26例與常規培養方法結果完全一緻,符閤率達到92.9%;雙盲模擬樣本的檢測符閤率達到100%.
[목적]이용가견광기인심편기술,침대12충상견식원성치병균,건립쾌속、준학、고통량적진단방법.[방법]설계파세균16s rDNA화23s rDNA적통용인물,반향인물5'단표기생물소;특이과핵감산탐침설계재량대인물지간적가변구,5'단표기안기기단.장탐침점양우고상재체제비기인심편,우화PCR반응체계후,PCR산물여심편점제탐침구역진행잡교,연후통과화학현색직접관찰결과,병평개반응체계적특이성、령민도、중복성등지표.수집림상양본28례,동시제비쌍맹모의오염양본10례,대검측방법진일보평개.[결과]:본시험소건립적기인심편방법가동시검측지하균、야이삼씨균、사문균、석양아포간균、공장만곡균、금황색포도구균、곽란호균、부용혈성호균、단증리씨균、포로씨균、변형간균、장출혈성대장간균O157:H7등12충식원성치병균,특이성고,조작간편;침대순배양식원성치병균반응체계적령민도위103 cfu/mL,모의양본적령민도위104 cfu/mL;중복성호;채용가견광기인심편방법검측28례림상양본,26례여상규배양방법결과완전일치,부합솔체도92.9%;쌍맹모의양본적검측부합솔체도100%.
