中国水产科学
中國水產科學
중국수산과학
Journal of Fishery Sciences of China
2008年
6期
910-916
,共7页
卜兴江%仉晓文%孙允东%赵小凡%王金星
蔔興江%仉曉文%孫允東%趙小凡%王金星
복흥강%장효문%손윤동%조소범%왕금성
中国明对虾%组织蛋白酶L%原核重组表达%组织分布
中國明對蝦%組織蛋白酶L%原覈重組錶達%組織分佈
중국명대하%조직단백매L%원핵중조표체%조직분포
组织蛋白酶L属于半胱氨酸蛋白酶中的木瓜蛋白酶超家族,在哺乳动物中它与抗原提呈、肿瘤入侵和转移、骨质吸收、细胞凋亡等许多生命活动有关.但对其在无脊椎动物中的功能了解的不多.从中国明对虾(Fenneropenaeuschinensis)中克隆得到了组织蛋白酶L基因,为了进一步研究组织蛋白酶L的组织分布及其功能,对该基因进行了重组表达.将中国明对虾组织蛋白酶L基因的酶原片段亚克隆进原核表达载体pET30a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),再进行诱导表达,表达产物经SDS-PAGE电泳检测,其分子量在40 kD左右,与期望的中国明对虾组织蛋白酶L的分子量一致.表达产物形成包涵体,经过对包涵体变性和复性,并进行His-tag柱亲和纯化,得到了纯化的蛋白.利用重组蛋白制备了的兔抗血清.Western实验表明,组织蛋白酶L在中国明对虾的肝、胃、肠中有表达,而在卵巢中没有表达.[中国水产科学,2008,15(6):910-916]
組織蛋白酶L屬于半胱氨痠蛋白酶中的木瓜蛋白酶超傢族,在哺乳動物中它與抗原提呈、腫瘤入侵和轉移、骨質吸收、細胞凋亡等許多生命活動有關.但對其在無脊椎動物中的功能瞭解的不多.從中國明對蝦(Fenneropenaeuschinensis)中剋隆得到瞭組織蛋白酶L基因,為瞭進一步研究組織蛋白酶L的組織分佈及其功能,對該基因進行瞭重組錶達.將中國明對蝦組織蛋白酶L基因的酶原片段亞剋隆進原覈錶達載體pET30a中,轉化大腸桿菌BL21(DE3),再進行誘導錶達,錶達產物經SDS-PAGE電泳檢測,其分子量在40 kD左右,與期望的中國明對蝦組織蛋白酶L的分子量一緻.錶達產物形成包涵體,經過對包涵體變性和複性,併進行His-tag柱親和純化,得到瞭純化的蛋白.利用重組蛋白製備瞭的兔抗血清.Western實驗錶明,組織蛋白酶L在中國明對蝦的肝、胃、腸中有錶達,而在卵巢中沒有錶達.[中國水產科學,2008,15(6):910-916]
조직단백매L속우반광안산단백매중적목과단백매초가족,재포유동물중타여항원제정、종류입침화전이、골질흡수、세포조망등허다생명활동유관.단대기재무척추동물중적공능료해적불다.종중국명대하(Fenneropenaeuschinensis)중극륭득도료조직단백매L기인,위료진일보연구조직단백매L적조직분포급기공능,대해기인진행료중조표체.장중국명대하조직단백매L기인적매원편단아극륭진원핵표체재체pET30a중,전화대장간균BL21(DE3),재진행유도표체,표체산물경SDS-PAGE전영검측,기분자량재40 kD좌우,여기망적중국명대하조직단백매L적분자량일치.표체산물형성포함체,경과대포함체변성화복성,병진행His-tag주친화순화,득도료순화적단백.이용중조단백제비료적토항혈청.Western실험표명,조직단백매L재중국명대하적간、위、장중유표체,이재란소중몰유표체.[중국수산과학,2008,15(6):910-916]
