浙江大学学报（农业与生命科学版）
浙江大學學報（農業與生命科學版）
절강대학학보（농업여생명과학판）
JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY(AGRICULTURE & LIFE SCIENCES)
2008年
6期
621-628
,共8页
线粒体%线粒体DNA%显微注射%转线粒体%转线粒体小鼠
線粒體%線粒體DNA%顯微註射%轉線粒體%轉線粒體小鼠
선립체%선립체DNA%현미주사%전선립체%전선립체소서
利用显微注射线粒体技术建立转人线粒体小鼠模型,研究外源突变mtDNA在不同组织的分布及遗传规律,探讨mtDNA A3243G点突变对线粒体功能的影响.从健康成人及2型糖尿病患者(携带mtDNA 3243A-G突变)血液标本中分离有活性的线粒体,将其显微注射至小鼠受精卵,胚胎移植,产出仔鼠后利用分子生物学方法检测人mtDNA及mtDNA A3243G点突变.获得嵌合体小鼠后,对其空腹血糖和全血乳酸进行测定,并使用荧光法和比色法分析A3243G点突变小鼠重要脏器组织细胞活性氧生成量(ROS)、线粒体复合酶Ⅰ和Ⅳ活力及线粒体ATP合成活力的变化.研究结果显示:在1只雌性(转健康人线粒体)和2只雄性小鼠(转患者线粒体)中检测到人mtDNA,其中2只雄性小鼠携带mtDNA 3243A-G突变;将嵌和体雌鼠与野生型C57BL/6J 雄鼠交配后,在1只后代仔鼠中检测到人mtDNA;人mtDNA仅在嵌合小鼠的部分组织中表达.在含有mtDNA A3243G突变的组织中发现,线粒体复合酶Ⅰ、Ⅳ活力降低,ATP合成速率下降,ROS水平升高,说明A3243G点突变能损伤线粒体正常功能从而导致疾病的发生.综上所述,本研究利用显微注射法成功建立了嵌和小鼠,引入了致病性的点突变,为线粒体疾病的研究提供了良好的思路.
利用顯微註射線粒體技術建立轉人線粒體小鼠模型,研究外源突變mtDNA在不同組織的分佈及遺傳規律,探討mtDNA A3243G點突變對線粒體功能的影響.從健康成人及2型糖尿病患者(攜帶mtDNA 3243A-G突變)血液標本中分離有活性的線粒體,將其顯微註射至小鼠受精卵,胚胎移植,產齣仔鼠後利用分子生物學方法檢測人mtDNA及mtDNA A3243G點突變.穫得嵌閤體小鼠後,對其空腹血糖和全血乳痠進行測定,併使用熒光法和比色法分析A3243G點突變小鼠重要髒器組織細胞活性氧生成量(ROS)、線粒體複閤酶Ⅰ和Ⅳ活力及線粒體ATP閤成活力的變化.研究結果顯示:在1隻雌性(轉健康人線粒體)和2隻雄性小鼠(轉患者線粒體)中檢測到人mtDNA,其中2隻雄性小鼠攜帶mtDNA 3243A-G突變;將嵌和體雌鼠與野生型C57BL/6J 雄鼠交配後,在1隻後代仔鼠中檢測到人mtDNA;人mtDNA僅在嵌閤小鼠的部分組織中錶達.在含有mtDNA A3243G突變的組織中髮現,線粒體複閤酶Ⅰ、Ⅳ活力降低,ATP閤成速率下降,ROS水平升高,說明A3243G點突變能損傷線粒體正常功能從而導緻疾病的髮生.綜上所述,本研究利用顯微註射法成功建立瞭嵌和小鼠,引入瞭緻病性的點突變,為線粒體疾病的研究提供瞭良好的思路.
이용현미주사선립체기술건립전인선립체소서모형,연구외원돌변mtDNA재불동조직적분포급유전규률,탐토mtDNA A3243G점돌변대선립체공능적영향.종건강성인급2형당뇨병환자(휴대mtDNA 3243A-G돌변)혈액표본중분리유활성적선립체,장기현미주사지소서수정란,배태이식,산출자서후이용분자생물학방법검측인mtDNA급mtDNA A3243G점돌변.획득감합체소서후,대기공복혈당화전혈유산진행측정,병사용형광법화비색법분석A3243G점돌변소서중요장기조직세포활성양생성량(ROS)、선립체복합매Ⅰ화Ⅳ활력급선립체ATP합성활력적변화.연구결과현시:재1지자성(전건강인선립체)화2지웅성소서(전환자선립체)중검측도인mtDNA,기중2지웅성소서휴대mtDNA 3243A-G돌변;장감화체자서여야생형C57BL/6J 웅서교배후,재1지후대자서중검측도인mtDNA;인mtDNA부재감합소서적부분조직중표체.재함유mtDNA A3243G돌변적조직중발현,선립체복합매Ⅰ、Ⅳ활력강저,ATP합성속솔하강,ROS수평승고,설명A3243G점돌변능손상선립체정상공능종이도치질병적발생.종상소술,본연구이용현미주사법성공건립료감화소서,인입료치병성적점돌변,위선립체질병적연구제공료량호적사로.
