军事医学科学院院刊
軍事醫學科學院院刊
군사의학과학원원간
BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES
2008年
3期
241-244
,共4页
李泽鸿%张国利%岳玉环%朱平
李澤鴻%張國利%嶽玉環%硃平
리택홍%장국리%악옥배%주평
亲和标记His-tag%DAB389(Gly4Ser)2-αMSH%重组蛋白%基因表达%免疫毒素类%白喉毒素
親和標記His-tag%DAB389(Gly4Ser)2-αMSH%重組蛋白%基因錶達%免疫毒素類%白喉毒素
친화표기His-tag%DAB389(Gly4Ser)2-αMSH%중조단백%기인표체%면역독소류%백후독소
目的:构建含有亲和标记His-tag的DAB389 (Gly4Ser)2-αMSH重组蛋白,便于融合蛋白质的纯化.方法:利用含有His-tag序列、Factor Xa酶切识别序列、白喉毒素N端序列的基因作上游引物,含有αMSH全序列和(Gly4Ser)2互补序列基因作下游引物,以pET28a/DAB389(Gly4Ser)2EGF为模板,PCR扩增目的基因片段,并插入到原核表达载体pET28a中,构建了重组表达载体pET28a/亲和标记DAB389(Gly4Ser)2-αMSH,融合蛋白在BL21(λDE3)中以可溶形式表达,通过硫酸铵盐析、亲和层析纯化、脱盐、Factor Xa酶切得到重组蛋白纯品.结果:扩增的片段与理论值一致,序列分析正确;目的蛋白表达量约占菌体总蛋白量的30.6%;纯化得到纯度为94.36%的重组蛋白.结论:成功构建了含有His-tag的DAB389 (Gly4Ser)2-αMSH重组蛋白,减少了纯化步骤,为进一步研究重组毒素、简便纯化途径奠定基础.
目的:構建含有親和標記His-tag的DAB389 (Gly4Ser)2-αMSH重組蛋白,便于融閤蛋白質的純化.方法:利用含有His-tag序列、Factor Xa酶切識彆序列、白喉毒素N耑序列的基因作上遊引物,含有αMSH全序列和(Gly4Ser)2互補序列基因作下遊引物,以pET28a/DAB389(Gly4Ser)2EGF為模闆,PCR擴增目的基因片段,併插入到原覈錶達載體pET28a中,構建瞭重組錶達載體pET28a/親和標記DAB389(Gly4Ser)2-αMSH,融閤蛋白在BL21(λDE3)中以可溶形式錶達,通過硫痠銨鹽析、親和層析純化、脫鹽、Factor Xa酶切得到重組蛋白純品.結果:擴增的片段與理論值一緻,序列分析正確;目的蛋白錶達量約佔菌體總蛋白量的30.6%;純化得到純度為94.36%的重組蛋白.結論:成功構建瞭含有His-tag的DAB389 (Gly4Ser)2-αMSH重組蛋白,減少瞭純化步驟,為進一步研究重組毒素、簡便純化途徑奠定基礎.
목적:구건함유친화표기His-tag적DAB389 (Gly4Ser)2-αMSH중조단백,편우융합단백질적순화.방법:이용함유His-tag서렬、Factor Xa매절식별서렬、백후독소N단서렬적기인작상유인물,함유αMSH전서렬화(Gly4Ser)2호보서렬기인작하유인물,이pET28a/DAB389(Gly4Ser)2EGF위모판,PCR확증목적기인편단,병삽입도원핵표체재체pET28a중,구건료중조표체재체pET28a/친화표기DAB389(Gly4Ser)2-αMSH,융합단백재BL21(λDE3)중이가용형식표체,통과류산안염석、친화층석순화、탈염、Factor Xa매절득도중조단백순품.결과:확증적편단여이론치일치,서렬분석정학;목적단백표체량약점균체총단백량적30.6%;순화득도순도위94.36%적중조단백.결론:성공구건료함유His-tag적DAB389 (Gly4Ser)2-αMSH중조단백,감소료순화보취,위진일보연구중조독소、간편순화도경전정기출.
