核技术
覈技術
핵기술
NUCLEAR TECHNIQUES
2008年
11期
854-858
,共5页
尹小花%兰晓莉%王瑞华%刘影%张永学
尹小花%蘭曉莉%王瑞華%劉影%張永學
윤소화%란효리%왕서화%류영%장영학
报告基因%报告探针%腺病毒%细胞摄取%心肌细胞
報告基因%報告探針%腺病毒%細胞攝取%心肌細胞
보고기인%보고탐침%선병독%세포섭취%심기세포
携带HSV1-tk的重组腺病毒(Ad5-tk)以感染复数(MOI)为20、40、80的病毒滴度感染体外培养的乳鼠原代心肌细胞;通过四甲基偶氮唑蓝(MTE)比色法检测感染后心肌细胞活力;应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测基因转导后心肌细胞内HSV1-tk mRNA的表达情况,并研究对报告探针125I-FIAU的摄取情况.结果显示:不同滴度Ad5-tk感染组心肌细胞存活率与时间均呈负相关.且病毒滴度越大.心肌细胞存活率越低;心肌细胞感染Ad5-tk后24 h,RT-PCR即可检测到.HSV1-tk mRNA的表达,且MOI=40感染组的表达量高于MOI=20感染组(P<0.01);心肌细胞感染不同滴度Ad5-tk后对125FIAU的摄取与时间呈正相关,且MOI=40感染组在各时间点的摄取率高于其余各组(P<0.01).表明腺病毒载体介导的报告基因HSV1-tk进入心肌细胞后,能表达生成有活性的磷酸化酶HSV1-TK,使心肌细胞对核素标记报告探针125I-FIAU有明确的摄取,摄取程度与时间呈正相关,且感染滴度为40时摄取率最高,这为活体报告基因心脏显像提供了细胞水平依据.
攜帶HSV1-tk的重組腺病毒(Ad5-tk)以感染複數(MOI)為20、40、80的病毒滴度感染體外培養的乳鼠原代心肌細胞;通過四甲基偶氮唑藍(MTE)比色法檢測感染後心肌細胞活力;應用半定量逆轉錄-聚閤酶鏈反應(RT-PCR)檢測基因轉導後心肌細胞內HSV1-tk mRNA的錶達情況,併研究對報告探針125I-FIAU的攝取情況.結果顯示:不同滴度Ad5-tk感染組心肌細胞存活率與時間均呈負相關.且病毒滴度越大.心肌細胞存活率越低;心肌細胞感染Ad5-tk後24 h,RT-PCR即可檢測到.HSV1-tk mRNA的錶達,且MOI=40感染組的錶達量高于MOI=20感染組(P<0.01);心肌細胞感染不同滴度Ad5-tk後對125FIAU的攝取與時間呈正相關,且MOI=40感染組在各時間點的攝取率高于其餘各組(P<0.01).錶明腺病毒載體介導的報告基因HSV1-tk進入心肌細胞後,能錶達生成有活性的燐痠化酶HSV1-TK,使心肌細胞對覈素標記報告探針125I-FIAU有明確的攝取,攝取程度與時間呈正相關,且感染滴度為40時攝取率最高,這為活體報告基因心髒顯像提供瞭細胞水平依據.
휴대HSV1-tk적중조선병독(Ad5-tk)이감염복수(MOI)위20、40、80적병독적도감염체외배양적유서원대심기세포;통과사갑기우담서람(MTE)비색법검측감염후심기세포활력;응용반정량역전록-취합매련반응(RT-PCR)검측기인전도후심기세포내HSV1-tk mRNA적표체정황,병연구대보고탐침125I-FIAU적섭취정황.결과현시:불동적도Ad5-tk감염조심기세포존활솔여시간균정부상관.차병독적도월대.심기세포존활솔월저;심기세포감염Ad5-tk후24 h,RT-PCR즉가검측도.HSV1-tk mRNA적표체,차MOI=40감염조적표체량고우MOI=20감염조(P<0.01);심기세포감염불동적도Ad5-tk후대125FIAU적섭취여시간정정상관,차MOI=40감염조재각시간점적섭취솔고우기여각조(P<0.01).표명선병독재체개도적보고기인HSV1-tk진입심기세포후,능표체생성유활성적린산화매HSV1-TK,사심기세포대핵소표기보고탐침125I-FIAU유명학적섭취,섭취정도여시간정정상관,차감염적도위40시섭취솔최고,저위활체보고기인심장현상제공료세포수평의거.
