中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2008年
37期
7310-7313
,共4页
曲彦隆%武志超%王春雷%周继辉
麯彥隆%武誌超%王春雷%週繼輝
곡언륭%무지초%왕춘뢰%주계휘
生长分化因子5%质粒%组织工程%肌腱
生長分化因子5%質粒%組織工程%肌腱
생장분화인자5%질립%조직공정%기건
背景:生长分化因子5是一种刺激肌腱、韧带塑型,增强愈合反应有效的生长因子,在活性组织工程肌腱构建中有重要作用.目的:构建人重组pcDNA6.2/生长分化因子5质粒,为转染基质干细胞向肌腱诱导分化实验奠定基础.设计、时间及地点:细胞基因工程体外实验,于2007-08/12在哈尔滨医科大学遗传学教研室和分子生物学教研室完成.材料:根据Genbank(NM000557)中人生长分化因子5的序列化学合成一对引物,从人胎儿软骨组织提取总RNA.方法:通过反转录-聚合酶链反应得到人生长分化因子5完整成熟肽基因.将所得基因片段插入克隆载体pcDNA6.2并转化入JM109菌株,提取重组质粒,PCR鉴定、酶切鉴定并测序.主要观察指标:反转录-聚合酶链反应检测结果,PCR及SalⅠ和BamHⅠ双酶切鉴定结果,重组质粒测序与Genbank中序列比较结果.结果:电泳显示,反转录-聚合酶链反应产物为一长约380 bp的带,阳性克隆质粒经PCR电泳及双酶切均出现约380 bp的片段.测序表明与Genbank中的序列完全相符.结论:成功构建出人重组pcDNA6.2/生长分化因子5质粒,为组织工程化肌腱过程中种子细胞的制备提供转染质粒.
揹景:生長分化因子5是一種刺激肌腱、韌帶塑型,增彊愈閤反應有效的生長因子,在活性組織工程肌腱構建中有重要作用.目的:構建人重組pcDNA6.2/生長分化因子5質粒,為轉染基質榦細胞嚮肌腱誘導分化實驗奠定基礎.設計、時間及地點:細胞基因工程體外實驗,于2007-08/12在哈爾濱醫科大學遺傳學教研室和分子生物學教研室完成.材料:根據Genbank(NM000557)中人生長分化因子5的序列化學閤成一對引物,從人胎兒軟骨組織提取總RNA.方法:通過反轉錄-聚閤酶鏈反應得到人生長分化因子5完整成熟肽基因.將所得基因片段插入剋隆載體pcDNA6.2併轉化入JM109菌株,提取重組質粒,PCR鑒定、酶切鑒定併測序.主要觀察指標:反轉錄-聚閤酶鏈反應檢測結果,PCR及SalⅠ和BamHⅠ雙酶切鑒定結果,重組質粒測序與Genbank中序列比較結果.結果:電泳顯示,反轉錄-聚閤酶鏈反應產物為一長約380 bp的帶,暘性剋隆質粒經PCR電泳及雙酶切均齣現約380 bp的片段.測序錶明與Genbank中的序列完全相符.結論:成功構建齣人重組pcDNA6.2/生長分化因子5質粒,為組織工程化肌腱過程中種子細胞的製備提供轉染質粒.
배경:생장분화인자5시일충자격기건、인대소형,증강유합반응유효적생장인자,재활성조직공정기건구건중유중요작용.목적:구건인중조pcDNA6.2/생장분화인자5질립,위전염기질간세포향기건유도분화실험전정기출.설계、시간급지점:세포기인공정체외실험,우2007-08/12재합이빈의과대학유전학교연실화분자생물학교연실완성.재료:근거Genbank(NM000557)중인생장분화인자5적서렬화학합성일대인물,종인태인연골조직제취총RNA.방법:통과반전록-취합매련반응득도인생장분화인자5완정성숙태기인.장소득기인편단삽입극륭재체pcDNA6.2병전화입JM109균주,제취중조질립,PCR감정、매절감정병측서.주요관찰지표:반전록-취합매련반응검측결과,PCR급SalⅠ화BamHⅠ쌍매절감정결과,중조질립측서여Genbank중서렬비교결과.결과:전영현시,반전록-취합매련반응산물위일장약380 bp적대,양성극륭질립경PCR전영급쌍매절균출현약380 bp적편단.측서표명여Genbank중적서렬완전상부.결론:성공구건출인중조pcDNA6.2/생장분화인자5질립,위조직공정화기건과정중충자세포적제비제공전염질립.
