实验与检验医学
實驗與檢驗醫學
실험여검험의학
EXPERIMENTAL AND LABORATORY MEDICINE
2008年
2期
119-122
,共4页
蒋卫平%朱亚非%李欣华%吴日荷%张晓梅
蔣衛平%硃亞非%李訢華%吳日荷%張曉梅
장위평%주아비%리흔화%오일하%장효매
实时荧光定量RT-PCR%哮喘%叉状头/翅膀状螺旋转录因子%CD4+CD25+调节性T细胞
實時熒光定量RT-PCR%哮喘%扠狀頭/翅膀狀螺鏇轉錄因子%CD4+CD25+調節性T細胞
실시형광정량RT-PCR%효천%차상두/시방상라선전록인자%CD4+CD25+조절성T세포
目的 探讨人外周血单个核细胞中FOXF3 mRNA的表达与CD4+CD25+Treg表达的相关性.方法 提取人外周血单个核细胞总RNA.逆转录成mRNA,以B-actin为内参照,实时荧光定量RT-PCR检测29例哮喘患儿及24例同龄对照FOXP3 mRNA的相对表达量,采用融解曲线和琼脂糖电泳鉴定PCR产物特异性;同时采用流式细胞技术检测CD4*CD25q'reg的比例.结果 哮喘患儿组CD4+CD25+Treg细胞百分率明显低于同龄对照组,P＜0.01;FOXP3 mRNA的表达也显著降低,P＜0.05;FOXP3和βactin的融解曲线分析表明均仅有单一峰,Tm值分别为82.4c℃和87.8℃;琼脂糖电泳显示都仅有单一扩增产物.结论 应用SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR技术检测FOXP3 mRNA表达水平简便、经济、可行,哮喘患儿CD4+CD25+Treg明显降低可能参与哮喘发病,FOXP3表达降低可能是导致CD4+CD25+Treg发育障碍的重要因素.
目的 探討人外週血單箇覈細胞中FOXF3 mRNA的錶達與CD4+CD25+Treg錶達的相關性.方法 提取人外週血單箇覈細胞總RNA.逆轉錄成mRNA,以B-actin為內參照,實時熒光定量RT-PCR檢測29例哮喘患兒及24例同齡對照FOXP3 mRNA的相對錶達量,採用融解麯線和瓊脂糖電泳鑒定PCR產物特異性;同時採用流式細胞技術檢測CD4*CD25q'reg的比例.結果 哮喘患兒組CD4+CD25+Treg細胞百分率明顯低于同齡對照組,P＜0.01;FOXP3 mRNA的錶達也顯著降低,P＜0.05;FOXP3和βactin的融解麯線分析錶明均僅有單一峰,Tm值分彆為82.4c℃和87.8℃;瓊脂糖電泳顯示都僅有單一擴增產物.結論 應用SYBR Green I實時熒光定量RT-PCR技術檢測FOXP3 mRNA錶達水平簡便、經濟、可行,哮喘患兒CD4+CD25+Treg明顯降低可能參與哮喘髮病,FOXP3錶達降低可能是導緻CD4+CD25+Treg髮育障礙的重要因素.
목적 탐토인외주혈단개핵세포중FOXF3 mRNA적표체여CD4+CD25+Treg표체적상관성.방법 제취인외주혈단개핵세포총RNA.역전록성mRNA,이B-actin위내삼조,실시형광정량RT-PCR검측29례효천환인급24례동령대조FOXP3 mRNA적상대표체량,채용융해곡선화경지당전영감정PCR산물특이성;동시채용류식세포기술검측CD4*CD25q'reg적비례.결과 효천환인조CD4+CD25+Treg세포백분솔명현저우동령대조조,P＜0.01;FOXP3 mRNA적표체야현저강저,P＜0.05;FOXP3화βactin적융해곡선분석표명균부유단일봉,Tm치분별위82.4c℃화87.8℃;경지당전영현시도부유단일확증산물.결론 응용SYBR Green I실시형광정량RT-PCR기술검측FOXP3 mRNA표체수평간편、경제、가행,효천환인CD4+CD25+Treg명현강저가능삼여효천발병,FOXP3표체강저가능시도치CD4+CD25+Treg발육장애적중요인소.
