细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2008年
1期
69-71
,共3页
王学菊%刘璟%万敏%王莉%吴秀丽%卫红飞%于永利%王丽颖
王學菊%劉璟%萬敏%王莉%吳秀麗%衛紅飛%于永利%王麗穎
왕학국%류경%만민%왕리%오수려%위홍비%우영리%왕려영
MTT比色法%脾细胞增生%BW006%活性
MTT比色法%脾細胞增生%BW006%活性
MTT비색법%비세포증생%BW006%활성
目的:B型CpG ODN,BW006作为疫苗佐剂已进入临床试验阶段,所以需要建立稳定、安全、简便易行的活性检测方法以控制不同批次BW006的生产质量.方法:根据BW006具有刺激人PBMC和小鼠脾细胞增生的特点,选择无放射性污染的MTT比色法作为首选检测方案.用BW006刺激BALB/c小鼠脾细胞作为筛选平台,确定如下反应条件:脾细胞用量、培养板形状、BW006浓度、培养液体积和培养时间以及如何优化MTT检测过程以提高反应灵敏度.结果:用3 mg/L BW006与96孔平底板中含100 mL/L FBS的200μL无酚红RPMI1640培养的6×105个小鼠脾细胞在37℃含50 mL/L C02孵箱中共孵育36 h.随后每孔弃100 μL上清,加入MTT(5 g/L)10 μL,37℃避光孵育4 h使各孔充分形成甲瓒颗粒.每孔加入DMSO 150 μL,经平板振荡器振荡20 min至颗粒完全溶解,在酶标仪上检测A578值即可.结论:建立了无污染、造价低、可操作性强的BW006活性检测方法.
目的:B型CpG ODN,BW006作為疫苗佐劑已進入臨床試驗階段,所以需要建立穩定、安全、簡便易行的活性檢測方法以控製不同批次BW006的生產質量.方法:根據BW006具有刺激人PBMC和小鼠脾細胞增生的特點,選擇無放射性汙染的MTT比色法作為首選檢測方案.用BW006刺激BALB/c小鼠脾細胞作為篩選平檯,確定如下反應條件:脾細胞用量、培養闆形狀、BW006濃度、培養液體積和培養時間以及如何優化MTT檢測過程以提高反應靈敏度.結果:用3 mg/L BW006與96孔平底闆中含100 mL/L FBS的200μL無酚紅RPMI1640培養的6×105箇小鼠脾細胞在37℃含50 mL/L C02孵箱中共孵育36 h.隨後每孔棄100 μL上清,加入MTT(5 g/L)10 μL,37℃避光孵育4 h使各孔充分形成甲瓚顆粒.每孔加入DMSO 150 μL,經平闆振盪器振盪20 min至顆粒完全溶解,在酶標儀上檢測A578值即可.結論:建立瞭無汙染、造價低、可操作性彊的BW006活性檢測方法.
목적:B형CpG ODN,BW006작위역묘좌제이진입림상시험계단,소이수요건립은정、안전、간편역행적활성검측방법이공제불동비차BW006적생산질량.방법:근거BW006구유자격인PBMC화소서비세포증생적특점,선택무방사성오염적MTT비색법작위수선검측방안.용BW006자격BALB/c소서비세포작위사선평태,학정여하반응조건:비세포용량、배양판형상、BW006농도、배양액체적화배양시간이급여하우화MTT검측과정이제고반응령민도.결과:용3 mg/L BW006여96공평저판중함100 mL/L FBS적200μL무분홍RPMI1640배양적6×105개소서비세포재37℃함50 mL/L C02부상중공부육36 h.수후매공기100 μL상청,가입MTT(5 g/L)10 μL,37℃피광부육4 h사각공충분형성갑찬과립.매공가입DMSO 150 μL,경평판진탕기진탕20 min지과립완전용해,재매표의상검측A578치즉가.결론:건립료무오염、조개저、가조작성강적BW006활성검측방법.
