细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2008年
2期
178-180
,共3页
席俊%张改平%何礼洋%朱礼倩%南楠%张利娜%邓瑞广%李学伍
席俊%張改平%何禮洋%硃禮倩%南楠%張利娜%鄧瑞廣%李學伍
석준%장개평%하례양%주례천%남남%장리나%산서엄%리학오
牛Fcγ2R%胞外区基因%克隆%表达
牛Fcγ2R%胞外區基因%剋隆%錶達
우Fcγ2R%포외구기인%극륭%표체
目的:构建牛Fcγ2R胞外区基因的原核表达载体,并在E.coli BL21(DE3)中表达.方法:提取健康成年牛的白细胞总RNA,经RT-PCR扩增牛Fcγ2R胞外区基因片段,并将其克隆到载体pGEM-T Easy,经限制性内切酶EcoR I和 Not I双酶切鉴定及序列测定后,再将其亚克隆入原核表达载体pET28a中,构建重组质粒pET-2R,转化E.coli BL21(DE3)经IPTG诱导表达组氨酸融合蛋白.结果:获得682 bp的编码牛Fcγ2R胞外区基因片段.以构建的重组质粒pET-2R转化E.coli BL21(DE3)后,经IPTG诱导,表达出相对分子质量(Mr)约为30 000的重组蛋白.SDS-PAGE分析显示,表达的蛋白主要以不溶性包涵体的形式存在于E.coli BL21(DE3)的胞质中,Western blot检测表明该蛋白能和牛IgG2结合.结论:成功地构建了原核表达载体pET-2R,并表达出重组蛋白.为研究牛IgG和受体的相互作用机制及其介导的免疫反应打下了基础.
目的:構建牛Fcγ2R胞外區基因的原覈錶達載體,併在E.coli BL21(DE3)中錶達.方法:提取健康成年牛的白細胞總RNA,經RT-PCR擴增牛Fcγ2R胞外區基因片段,併將其剋隆到載體pGEM-T Easy,經限製性內切酶EcoR I和 Not I雙酶切鑒定及序列測定後,再將其亞剋隆入原覈錶達載體pET28a中,構建重組質粒pET-2R,轉化E.coli BL21(DE3)經IPTG誘導錶達組氨痠融閤蛋白.結果:穫得682 bp的編碼牛Fcγ2R胞外區基因片段.以構建的重組質粒pET-2R轉化E.coli BL21(DE3)後,經IPTG誘導,錶達齣相對分子質量(Mr)約為30 000的重組蛋白.SDS-PAGE分析顯示,錶達的蛋白主要以不溶性包涵體的形式存在于E.coli BL21(DE3)的胞質中,Western blot檢測錶明該蛋白能和牛IgG2結閤.結論:成功地構建瞭原覈錶達載體pET-2R,併錶達齣重組蛋白.為研究牛IgG和受體的相互作用機製及其介導的免疫反應打下瞭基礎.
목적:구건우Fcγ2R포외구기인적원핵표체재체,병재E.coli BL21(DE3)중표체.방법:제취건강성년우적백세포총RNA,경RT-PCR확증우Fcγ2R포외구기인편단,병장기극륭도재체pGEM-T Easy,경한제성내절매EcoR I화 Not I쌍매절감정급서렬측정후,재장기아극륭입원핵표체재체pET28a중,구건중조질립pET-2R,전화E.coli BL21(DE3)경IPTG유도표체조안산융합단백.결과:획득682 bp적편마우Fcγ2R포외구기인편단.이구건적중조질립pET-2R전화E.coli BL21(DE3)후,경IPTG유도,표체출상대분자질량(Mr)약위30 000적중조단백.SDS-PAGE분석현시,표체적단백주요이불용성포함체적형식존재우E.coli BL21(DE3)적포질중,Western blot검측표명해단백능화우IgG2결합.결론:성공지구건료원핵표체재체pET-2R,병표체출중조단백.위연구우IgG화수체적상호작용궤제급기개도적면역반응타하료기출.
