中国生物制品学杂志
中國生物製品學雜誌
중국생물제품학잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS
2007年
12期
880-883
,共4页
张雪燕%韩跃武%姚海燕%谢俊秋%张庆华
張雪燕%韓躍武%姚海燕%謝俊鞦%張慶華
장설연%한약무%요해연%사준추%장경화
人颗粒溶素%活性片段%原核表达
人顆粒溶素%活性片段%原覈錶達
인과립용소%활성편단%원핵표체
目的 构建人颗粒溶素(GMLY)活性片段原核表达载体.方法 采用RT-PCR技术从健康人外周单个核细胞中扩增出颗粒溶素活性片段cDNA,将其与表达载体pGEX-4T-1经限制性核酸内切酶双酶切后连接,转化E.coli BL21,挑取阳性菌落,抽提重组质粒并鉴定.IPTG诱导表达GST融合蛋白,亲和层析纯化,SDS-PAGE分析表达和纯化结果,抑菌圈法鉴定表达产物的活性.结果 重组质粒插入基因序列测定证实为颗粒溶素活性片段cDNA.表达产物经SDS-PAGE分析,在相对分子质量29000处出现一明显条带,与理论结果相符.抑菌试验表明,融合蛋白分子凝血酶切产物对革兰阳性的金黄色葡萄球菌ATCC25938有抑制作用.结论 已成功构建了人颗粒溶素活性片段原核表达载体,为进一步研究其抗菌、抗肿瘤作用奠定了基础.
目的 構建人顆粒溶素(GMLY)活性片段原覈錶達載體.方法 採用RT-PCR技術從健康人外週單箇覈細胞中擴增齣顆粒溶素活性片段cDNA,將其與錶達載體pGEX-4T-1經限製性覈痠內切酶雙酶切後連接,轉化E.coli BL21,挑取暘性菌落,抽提重組質粒併鑒定.IPTG誘導錶達GST融閤蛋白,親和層析純化,SDS-PAGE分析錶達和純化結果,抑菌圈法鑒定錶達產物的活性.結果 重組質粒插入基因序列測定證實為顆粒溶素活性片段cDNA.錶達產物經SDS-PAGE分析,在相對分子質量29000處齣現一明顯條帶,與理論結果相符.抑菌試驗錶明,融閤蛋白分子凝血酶切產物對革蘭暘性的金黃色葡萄毬菌ATCC25938有抑製作用.結論 已成功構建瞭人顆粒溶素活性片段原覈錶達載體,為進一步研究其抗菌、抗腫瘤作用奠定瞭基礎.
목적 구건인과립용소(GMLY)활성편단원핵표체재체.방법 채용RT-PCR기술종건강인외주단개핵세포중확증출과립용소활성편단cDNA,장기여표체재체pGEX-4T-1경한제성핵산내절매쌍매절후련접,전화E.coli BL21,도취양성균락,추제중조질립병감정.IPTG유도표체GST융합단백,친화층석순화,SDS-PAGE분석표체화순화결과,억균권법감정표체산물적활성.결과 중조질립삽입기인서렬측정증실위과립용소활성편단cDNA.표체산물경SDS-PAGE분석,재상대분자질량29000처출현일명현조대,여이론결과상부.억균시험표명,융합단백분자응혈매절산물대혁란양성적금황색포도구균ATCC25938유억제작용.결론 이성공구건료인과립용소활성편단원핵표체재체,위진일보연구기항균、항종류작용전정료기출.
