CAJ | 학술논문

目的构建日本血吸虫成虫T7噬菌体展示cDNA文库.方法用Trizol试剂提取日本血吸虫成虫总RNA,分离纯化mRNA,经随机引物反转录合成双链cDNA.在双链cDNA末端加上定向EcoR Ⅰ/Hind Ⅲ接头,再用EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ消化,使其成为两端分别带有EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ粘性末端的双链cDNA.收集300bp以上的双链cDNA片段,与T7Select 10-3b载体连接,经体外包装后,以大肠埃希菌BLT5403为宿主菌构建T7噬菌体展示cDNA文库.通过滴度测定及PCR技术鉴定文库质量,用7种特异性引物以PCR法从文库中钓取目的基因以检测文库的代表性.结果原始文库的库容量为4.98×106 pfu,扩增后文库滴度为3.85×1011 pfu/ml.对随机挑取的96个噬菌斑进行PCR鉴定,重组率为93.8%,其中95.6%的插入片段大于300 bp.7种特异性引物均能从文库中钓取到日本血吸虫成虫相关基因.结论构建了日本血吸虫成虫T7噬菌体展示cDNA文库.
목적 구건일본혈흡충성충T7서균체전시cDNA문고.방법 용Trizol시제제취일본혈흡충성충총RNA,분리순화mRNA,경수궤인물반전록합성쌍련cDNA.재쌍련cDNA말단가상정향EcoR Ⅰ/Hind Ⅲ접두,재용EcoR Ⅰ화Hind Ⅲ소화,사기성위량단분별대유EcoR Ⅰ화Hind Ⅲ점성말단적쌍련cDNA.수집300bp이상적쌍련cDNA편단,여T7Select 10-3b재체련접,경체외포장후,이대장애희균BLT5403위숙주균구건T7서균체전시cDNA문고.통과적도측정급PCR기술감정문고질량,용7충특이성인물이PCR법종문고중조취목적기인이검측문고적대표성.결과 원시문고적고용량위4.98×106 pfu,확증후문고적도위3.85×1011 pfu/ml.대수궤도취적96개서균반진행PCR감정,중조솔위93.8%,기중95.6%적삽입편단대우300 bp.7충특이성인물균능종문고중조취도일본혈흡충성충상관기인.결론 구건료일본혈흡충성충T7서균체전시cDNA문고.