微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2007年
6期
968-972
,共5页
Mito-PTEN%CoxVⅡ%腺病毒%线粒体%细胞凋亡
Mito-PTEN%CoxVⅡ%腺病毒%線粒體%細胞凋亡
Mito-PTEN%CoxVⅡ%선병독%선립체%세포조망
为研究抑癌基因PTEN在线粒体上的定位对细胞凋亡的影响,构建N端融合有细胞色素C氧化酶亚基七(CoxⅦ)的PTEN腺病毒重组体(Mito-PTEN).将CoxⅦ-PTEN片段克隆至腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,PmeⅠ线性化穿梭质粒,并与腺病毒基因组载体pAdeasy-1共转化大肠杆菌菌株BJ5183,鉴定重组体,并将阳性重组体转化至大肠杆菌菌株DH5α中进行扩增;经PacⅠ酶切后的重组体通过脂质体方法转染用于腺病毒包装的细胞HEK-293A,包装重组腺病毒,收集病毒液,反复扩增,进行病毒滴度的测定;通过绿色荧光蛋白(GFP)标签检测转染及感染效率;用Mito-PTEN腺病毒感染人表皮鳞状癌细胞A431,以流式细胞分析仪检测细胞凋亡情况.成功构建了Mito-PTEN的腺病毒重组体,并进行了该重组体的病毒包装,滴度为107pfu/mL,通过免疫印迹检测目的蛋白,并发现Mito-PTEN可以促进A431细胞的凋亡.Mito-PTEN的成功构建以及它对A431细胞凋亡的促进作用为研究PTEN在线粒体上的功能以及可能的在肿瘤治疗方面的应用提供了理论依据.
為研究抑癌基因PTEN在線粒體上的定位對細胞凋亡的影響,構建N耑融閤有細胞色素C氧化酶亞基七(CoxⅦ)的PTEN腺病毒重組體(Mito-PTEN).將CoxⅦ-PTEN片段剋隆至腺病毒穿梭載體pAdTrack-CMV中,PmeⅠ線性化穿梭質粒,併與腺病毒基因組載體pAdeasy-1共轉化大腸桿菌菌株BJ5183,鑒定重組體,併將暘性重組體轉化至大腸桿菌菌株DH5α中進行擴增;經PacⅠ酶切後的重組體通過脂質體方法轉染用于腺病毒包裝的細胞HEK-293A,包裝重組腺病毒,收集病毒液,反複擴增,進行病毒滴度的測定;通過綠色熒光蛋白(GFP)標籤檢測轉染及感染效率;用Mito-PTEN腺病毒感染人錶皮鱗狀癌細胞A431,以流式細胞分析儀檢測細胞凋亡情況.成功構建瞭Mito-PTEN的腺病毒重組體,併進行瞭該重組體的病毒包裝,滴度為107pfu/mL,通過免疫印跡檢測目的蛋白,併髮現Mito-PTEN可以促進A431細胞的凋亡.Mito-PTEN的成功構建以及它對A431細胞凋亡的促進作用為研究PTEN在線粒體上的功能以及可能的在腫瘤治療方麵的應用提供瞭理論依據.
위연구억암기인PTEN재선립체상적정위대세포조망적영향,구건N단융합유세포색소C양화매아기칠(CoxⅦ)적PTEN선병독중조체(Mito-PTEN).장CoxⅦ-PTEN편단극륭지선병독천사재체pAdTrack-CMV중,PmeⅠ선성화천사질립,병여선병독기인조재체pAdeasy-1공전화대장간균균주BJ5183,감정중조체,병장양성중조체전화지대장간균균주DH5α중진행확증;경PacⅠ매절후적중조체통과지질체방법전염용우선병독포장적세포HEK-293A,포장중조선병독,수집병독액,반복확증,진행병독적도적측정;통과록색형광단백(GFP)표첨검측전염급감염효솔;용Mito-PTEN선병독감염인표피린상암세포A431,이류식세포분석의검측세포조망정황.성공구건료Mito-PTEN적선병독중조체,병진행료해중조체적병독포장,적도위107pfu/mL,통과면역인적검측목적단백,병발현Mito-PTEN가이촉진A431세포적조망.Mito-PTEN적성공구건이급타대A431세포조망적촉진작용위연구PTEN재선립체상적공능이급가능적재종류치료방면적응용제공료이론의거.
