解放军医学杂志
解放軍醫學雜誌
해방군의학잡지
MEDICAL JOURNAL OF CHINESE PEOPLE'S LIBERATION ARMY
2008年
1期
59-61
,共3页
郑铁龙%成军%洪源%李晓光%张延峰
鄭鐵龍%成軍%洪源%李曉光%張延峰
정철룡%성군%홍원%리효광%장연봉
肝炎病毒,丙型%NS5ATP1基因%原核表达
肝炎病毒,丙型%NS5ATP1基因%原覈錶達
간염병독,병형%NS5ATP1기인%원핵표체
目的 构建丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A的反式激活蛋白1(NS5ATP1)基因的原核表达载体并诱导其表达,纯化表达的融合蛋白并制备多克隆抗体.方法 从pGBKT7-NS5ATP1质粒上切取NS5ATP1基因,克隆入pET32a(+)质粒,构建pET32a(+)-NS5ATP1表达载体,IPTG诱导融合蛋白表达.亲和镍柱层析纯化该融合蛋白后,免疫新西兰兔,获得多克隆抗体,ELISA法检测多抗效价.结果 以pET32a(+)-NS5ATP1表达载体分别转化DH5α、BL21菌后,经IPTG诱导,成功获得分子量为56kD左右的重组蛋白.SDS-PAGE分析显示,IPTG诱导4.5h时重组蛋白的表达量最高.Western blot证实其具有良好的抗原性.用该蛋白成功免疫新西兰白兔,获得了该蛋白的多克隆抗体,ELISA检测其效价＞1:512 000.结论 成功构建原核表达载体pET32a(+)-NS5ATP1,表达纯化NS5ATP1融合蛋白并制备了该蛋白的多克隆抗体,为进一步的研究奠定了基础.
目的 構建丙型肝炎病毒非結構蛋白NS5A的反式激活蛋白1(NS5ATP1)基因的原覈錶達載體併誘導其錶達,純化錶達的融閤蛋白併製備多剋隆抗體.方法 從pGBKT7-NS5ATP1質粒上切取NS5ATP1基因,剋隆入pET32a(+)質粒,構建pET32a(+)-NS5ATP1錶達載體,IPTG誘導融閤蛋白錶達.親和鎳柱層析純化該融閤蛋白後,免疫新西蘭兔,穫得多剋隆抗體,ELISA法檢測多抗效價.結果 以pET32a(+)-NS5ATP1錶達載體分彆轉化DH5α、BL21菌後,經IPTG誘導,成功穫得分子量為56kD左右的重組蛋白.SDS-PAGE分析顯示,IPTG誘導4.5h時重組蛋白的錶達量最高.Western blot證實其具有良好的抗原性.用該蛋白成功免疫新西蘭白兔,穫得瞭該蛋白的多剋隆抗體,ELISA檢測其效價＞1:512 000.結論 成功構建原覈錶達載體pET32a(+)-NS5ATP1,錶達純化NS5ATP1融閤蛋白併製備瞭該蛋白的多剋隆抗體,為進一步的研究奠定瞭基礎.
목적 구건병형간염병독비결구단백NS5A적반식격활단백1(NS5ATP1)기인적원핵표체재체병유도기표체,순화표체적융합단백병제비다극륭항체.방법 종pGBKT7-NS5ATP1질립상절취NS5ATP1기인,극륭입pET32a(+)질립,구건pET32a(+)-NS5ATP1표체재체,IPTG유도융합단백표체.친화얼주층석순화해융합단백후,면역신서란토,획득다극륭항체,ELISA법검측다항효개.결과 이pET32a(+)-NS5ATP1표체재체분별전화DH5α、BL21균후,경IPTG유도,성공획득분자량위56kD좌우적중조단백.SDS-PAGE분석현시,IPTG유도4.5h시중조단백적표체량최고.Western blot증실기구유량호적항원성.용해단백성공면역신서란백토,획득료해단백적다극륭항체,ELISA검측기효개＞1:512 000.결론 성공구건원핵표체재체pET32a(+)-NS5ATP1,표체순화NS5ATP1융합단백병제비료해단백적다극륭항체,위진일보적연구전정료기출.
