中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2007年
10期
12-16
,共5页
李海%彭宇%黎晓天%吴文言
李海%彭宇%黎曉天%吳文言
리해%팽우%려효천%오문언
Survivin%克隆%原核表达%纯化
Survivin%剋隆%原覈錶達%純化
Survivin%극륭%원핵표체%순화
Survivin蛋白抑制细胞的凋亡并参与调控细胞的分裂,在绝大多数肿瘤细胞中均有过量表达.本实验以人肝癌细胞系MHCC-97L总RNA为模板,应用RT-PCR的方法得到survivin cDNA,并构建了重组原核表达载体pET-21b(+)-survivin,导入BL21(DE3)菌株进行表达,表达产物以包涵体形式存在,表达量超过总蛋白的60%.Western blot结果表明表达产物与抗人survivin抗体发生特异性反应,经凝胶过滤层析后纯度达到95%以上,为进一步研究靶向Survivin的诊断试剂与抑制剂奠定了基础.
Survivin蛋白抑製細胞的凋亡併參與調控細胞的分裂,在絕大多數腫瘤細胞中均有過量錶達.本實驗以人肝癌細胞繫MHCC-97L總RNA為模闆,應用RT-PCR的方法得到survivin cDNA,併構建瞭重組原覈錶達載體pET-21b(+)-survivin,導入BL21(DE3)菌株進行錶達,錶達產物以包涵體形式存在,錶達量超過總蛋白的60%.Western blot結果錶明錶達產物與抗人survivin抗體髮生特異性反應,經凝膠過濾層析後純度達到95%以上,為進一步研究靶嚮Survivin的診斷試劑與抑製劑奠定瞭基礎.
Survivin단백억제세포적조망병삼여조공세포적분렬,재절대다수종류세포중균유과량표체.본실험이인간암세포계MHCC-97L총RNA위모판,응용RT-PCR적방법득도survivin cDNA,병구건료중조원핵표체재체pET-21b(+)-survivin,도입BL21(DE3)균주진행표체,표체산물이포함체형식존재,표체량초과총단백적60%.Western blot결과표명표체산물여항인survivin항체발생특이성반응,경응효과려층석후순도체도95%이상,위진일보연구파향Survivin적진단시제여억제제전정료기출.
