农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2007年
5期
884-887
,共4页
张石柱%王中康%彭国雄%曹月青%殷幼平%谢磊%刘静%夏玉先
張石柱%王中康%彭國雄%曹月青%慇幼平%謝磊%劉靜%夏玉先
장석주%왕중강%팽국웅%조월청%은유평%사뢰%류정%하옥선
绿僵菌%产孢基因%全长文库%均一化技术%switching mechanism at 5'end of RNA transcript(SMARTTM)%duplex-spe
綠僵菌%產孢基因%全長文庫%均一化技術%switching mechanism at 5'end of RNA transcript(SMARTTM)%duplex-spe
록강균%산포기인%전장문고%균일화기술%switching mechanism at 5'end of RNA transcript(SMARTTM)%duplex-spe
为高效获得与绿僵菌产孢相关的全长cDNA,采用DSN(duplex-specific nuclease)均一化技术与SMARTTM(switching mechanism at 5'end of RNA transcript)建库技术相结合的方法,构建了杀虫真菌金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae var.acridum)菌株CQMa102产孢时期的均一化全长cDNA文库.经检测,原始文库滴度为2.1×106cfu/mL,库容量超过6×106.随机挑取100个克隆,PCR方法测得文库重组率大于95%,插入片段平均长度1 500 bp.小规模测序分析表明,全长基因的比例超过60%.对组成性表达基因3-磷酸甘油醛脱氢酶G3PDH和微管蛋白β-tubulin均一化前后丰度检测表明,其丰度均有大幅度的下降,基本满足节约筛库的要求.
為高效穫得與綠僵菌產孢相關的全長cDNA,採用DSN(duplex-specific nuclease)均一化技術與SMARTTM(switching mechanism at 5'end of RNA transcript)建庫技術相結閤的方法,構建瞭殺蟲真菌金龜子綠僵菌(Metarhizium anisopliae var.acridum)菌株CQMa102產孢時期的均一化全長cDNA文庫.經檢測,原始文庫滴度為2.1×106cfu/mL,庫容量超過6×106.隨機挑取100箇剋隆,PCR方法測得文庫重組率大于95%,插入片段平均長度1 500 bp.小規模測序分析錶明,全長基因的比例超過60%.對組成性錶達基因3-燐痠甘油醛脫氫酶G3PDH和微管蛋白β-tubulin均一化前後豐度檢測錶明,其豐度均有大幅度的下降,基本滿足節約篩庫的要求.
위고효획득여록강균산포상관적전장cDNA,채용DSN(duplex-specific nuclease)균일화기술여SMARTTM(switching mechanism at 5'end of RNA transcript)건고기술상결합적방법,구건료살충진균금구자록강균(Metarhizium anisopliae var.acridum)균주CQMa102산포시기적균일화전장cDNA문고.경검측,원시문고적도위2.1×106cfu/mL,고용량초과6×106.수궤도취100개극륭,PCR방법측득문고중조솔대우95%,삽입편단평균장도1 500 bp.소규모측서분석표명,전장기인적비례초과60%.대조성성표체기인3-린산감유철탈경매G3PDH화미관단백β-tubulin균일화전후봉도검측표명,기봉도균유대폭도적하강,기본만족절약사고적요구.
