人CD226分子胞膜外区D1和D2真核表达载体的构建、表达和鉴定
인CD226분자포막외구D1화D2진핵표체재체적구건、표체화감정
Construction and expression of human CD226 extracellular domain 1 and domain 2 gene eudaryotic expression vectors and identification of the fusion proteins
  • 万方数据
    免疫学杂志 면역학잡지
    IMMUNOLOGICAL JOURNAL
    2007年 5期 499-501,505 ,共4页

    邓虎平%庄然%贾卫%张赟%张圆%户义%张新海%金伯泉

    산호평%장연%가위%장빈%장원%호의%장신해%금백천

    CD226%真核表达%融合蛋白 CD226%真覈錶達%融閤蛋白
    CD226%진핵표체%융합단백
    目的 构建含有人CD226分子胞膜外区结构域1(D1)和结构域2(D2)的真核表达载体,表达并纯化重组蛋白.方法用特异性引物分别扩增CD226 D1和D2的基因,定向插入真核表达载体pSecTag2B-Fc,进行酶切和DNA测序鉴定,重组质粒瞬时转染293T细胞,收集上清,纯化蛋白及SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物.结果利用PCR方法克隆出CD226胞膜外区D1和D2的基因,并正确插入pSecTag2B-Fc载体中,真核表达载体瞬时转染293T细胞,Western blot结果证实转染293T细胞的培养上清液中含有hCD226D1-Fc和hCD226D2-Fc融合蛋白,培养上清经亲和层析柱纯化,可获得较高纯度的重组蛋白.结论 成功的构建了分泌型融合蛋白hCD226D1-Fc和hCD226D2-Fc真核表达载体,获得纯度较高的融合蛋白,为进一步探讨其配受体的相互作用机制奠定了基础.
    목적 구건함유인CD226분자포막외구결구역1(D1)화결구역2(D2)적진핵표체재체,표체병순화중조단백.방법용특이성인물분별확증CD226 D1화D2적기인,정향삽입진핵표체재체pSecTag2B-Fc,진행매절화DNA측서감정,중조질립순시전염293T세포,수집상청,순화단백급SDS-PAGE화Western blot감정표체산물.결과이용PCR방법극륭출CD226포막외구D1화D2적기인,병정학삽입pSecTag2B-Fc재체중,진핵표체재체순시전염293T세포,Western blot결과증실전염293T세포적배양상청액중함유hCD226D1-Fc화hCD226D2-Fc융합단백,배양상청경친화층석주순화,가획득교고순도적중조단백.결론 성공적구건료분비형융합단백hCD226D1-Fc화hCD226D2-Fc진핵표체재체,획득순도교고적융합단백,위진일보탐토기배수체적상호작용궤제전정료기출.
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