生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2007年
4期
568-570
,共3页
乳腺癌易感基因2%RT-PCR%原核表达
乳腺癌易感基因2%RT-PCR%原覈錶達
유선암역감기인2%RT-PCR%원핵표체
目的:分别表达乳腺癌和卵巢癌易感基因BRCA2编码蛋白的N端500个氨基酸残基(nBRCA2)及其缺乏第3个外显子编码的蛋白(nBRCA2a),为分析比较含与不含第3个外显子所表达蛋白的功能差异准备条件.方法:采用RT-PCR,从BT-474细胞系的RNA扩增获得nBRCA2(编码1～500氨基酸残基)和nBRCA2a(编码1～18-105～500氨基酸残基)的基因片段,通过体外重组技术将目的基因片段连接到原核表达载体pGEX-2TK中,将经酶切和测序鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS受体菌,用IPTG诱导重组融合蛋白(与GST融合)的表达并进行纯化.结果和结论:构建了含有和不含有第3个外显子的重组原核表达质粒pGEX-2TK/nBRAC2和pGEX-2TK/nBRCA2a;融合表达产物经SDS-PAGE鉴定,并采用十二烷基肌氨酸钠进行了可溶性纯化,获得了相对分子质量分别为81 000和71 000的融合表达蛋白.
目的:分彆錶達乳腺癌和卵巢癌易感基因BRCA2編碼蛋白的N耑500箇氨基痠殘基(nBRCA2)及其缺乏第3箇外顯子編碼的蛋白(nBRCA2a),為分析比較含與不含第3箇外顯子所錶達蛋白的功能差異準備條件.方法:採用RT-PCR,從BT-474細胞繫的RNA擴增穫得nBRCA2(編碼1～500氨基痠殘基)和nBRCA2a(編碼1～18-105～500氨基痠殘基)的基因片段,通過體外重組技術將目的基因片段連接到原覈錶達載體pGEX-2TK中,將經酶切和測序鑒定正確的重組質粒轉化大腸桿菌BL21(DE3)pLysS受體菌,用IPTG誘導重組融閤蛋白(與GST融閤)的錶達併進行純化.結果和結論:構建瞭含有和不含有第3箇外顯子的重組原覈錶達質粒pGEX-2TK/nBRAC2和pGEX-2TK/nBRCA2a;融閤錶達產物經SDS-PAGE鑒定,併採用十二烷基肌氨痠鈉進行瞭可溶性純化,穫得瞭相對分子質量分彆為81 000和71 000的融閤錶達蛋白.
목적:분별표체유선암화란소암역감기인BRCA2편마단백적N단500개안기산잔기(nBRCA2)급기결핍제3개외현자편마적단백(nBRCA2a),위분석비교함여불함제3개외현자소표체단백적공능차이준비조건.방법:채용RT-PCR,종BT-474세포계적RNA확증획득nBRCA2(편마1～500안기산잔기)화nBRCA2a(편마1～18-105～500안기산잔기)적기인편단,통과체외중조기술장목적기인편단련접도원핵표체재체pGEX-2TK중,장경매절화측서감정정학적중조질립전화대장간균BL21(DE3)pLysS수체균,용IPTG유도중조융합단백(여GST융합)적표체병진행순화.결과화결론:구건료함유화불함유제3개외현자적중조원핵표체질립pGEX-2TK/nBRAC2화pGEX-2TK/nBRCA2a;융합표체산물경SDS-PAGE감정,병채용십이완기기안산납진행료가용성순화,획득료상대분자질량분별위81 000화71 000적융합표체단백.
