中国病毒学
中國病毒學
중국병독학
VIROLOGICA SINICA
2006年
5期
421-425
,共5页
陈娟%陈维贤%慕生枝%张君%黄爱龙
陳娟%陳維賢%慕生枝%張君%黃愛龍
진연%진유현%모생지%장군%황애룡
丙型肝炎病毒(HCV)%5'翻译区%结构域%启动子活性
丙型肝炎病毒(HCV)%5'翻譯區%結構域%啟動子活性
병형간염병독(HCV)%5'번역구%결구역%계동자활성
在前期工作已证实HCV基因组5'UTR DNA序列具有启动子活性的基础上,分别构建5'UTR 不同结构域的DNA序列驱动虫荧光素酶基因表达的质粒pGL3-5'UTR,转染HepG2细胞以及用全长的5'UTR cDNA构建质粒分别转染HepG2、Hela、HEK293、L02细胞,用双荧光素酶检测系统检测虫荧光素酶的表达水平,逆转录聚合酶链反应检测虫荧光素酶基因mRNA水平,并与相应对照作比较.结果显示当四个结构域都具备时,荧光素酶相对活性为5.91±0.65,为SV40启动子的18.7%;失去结构域I以后,荧光素酶相对活性为9.52±0.32;失去结构域I和II以后,荧光素酶相对活性为2.64±0.25;失去结构域III和IV以后,荧光素酶相对活性为0.32±0.09;失去结构域IV以后,荧光素酶相对活性为2.72±0.45,逆转录聚合酶链反应结果与之相符;全长5'UTR cDNA在L02、hepG2、HEK293、Hela细胞中荧光素酶相对活性分别为0.75,0.49,0.23,0.14. 结果提示结构域III是HCV5'UTR DNA序列具备启动子活性的核心结构,结构域I对其5'UTR DNA序列的启动子活性具有抑制效应,而结构域II和IV可增强5'UTR DNA序列的启动子活性;HCV5'UTR cDNA的启动子功能无组织特异性,但在正常的肝细胞(L02)中表达最高.
在前期工作已證實HCV基因組5'UTR DNA序列具有啟動子活性的基礎上,分彆構建5'UTR 不同結構域的DNA序列驅動蟲熒光素酶基因錶達的質粒pGL3-5'UTR,轉染HepG2細胞以及用全長的5'UTR cDNA構建質粒分彆轉染HepG2、Hela、HEK293、L02細胞,用雙熒光素酶檢測繫統檢測蟲熒光素酶的錶達水平,逆轉錄聚閤酶鏈反應檢測蟲熒光素酶基因mRNA水平,併與相應對照作比較.結果顯示噹四箇結構域都具備時,熒光素酶相對活性為5.91±0.65,為SV40啟動子的18.7%;失去結構域I以後,熒光素酶相對活性為9.52±0.32;失去結構域I和II以後,熒光素酶相對活性為2.64±0.25;失去結構域III和IV以後,熒光素酶相對活性為0.32±0.09;失去結構域IV以後,熒光素酶相對活性為2.72±0.45,逆轉錄聚閤酶鏈反應結果與之相符;全長5'UTR cDNA在L02、hepG2、HEK293、Hela細胞中熒光素酶相對活性分彆為0.75,0.49,0.23,0.14. 結果提示結構域III是HCV5'UTR DNA序列具備啟動子活性的覈心結構,結構域I對其5'UTR DNA序列的啟動子活性具有抑製效應,而結構域II和IV可增彊5'UTR DNA序列的啟動子活性;HCV5'UTR cDNA的啟動子功能無組織特異性,但在正常的肝細胞(L02)中錶達最高.
재전기공작이증실HCV기인조5'UTR DNA서렬구유계동자활성적기출상,분별구건5'UTR 불동결구역적DNA서렬구동충형광소매기인표체적질립pGL3-5'UTR,전염HepG2세포이급용전장적5'UTR cDNA구건질립분별전염HepG2、Hela、HEK293、L02세포,용쌍형광소매검측계통검측충형광소매적표체수평,역전록취합매련반응검측충형광소매기인mRNA수평,병여상응대조작비교.결과현시당사개결구역도구비시,형광소매상대활성위5.91±0.65,위SV40계동자적18.7%;실거결구역I이후,형광소매상대활성위9.52±0.32;실거결구역I화II이후,형광소매상대활성위2.64±0.25;실거결구역III화IV이후,형광소매상대활성위0.32±0.09;실거결구역IV이후,형광소매상대활성위2.72±0.45,역전록취합매련반응결과여지상부;전장5'UTR cDNA재L02、hepG2、HEK293、Hela세포중형광소매상대활성분별위0.75,0.49,0.23,0.14. 결과제시결구역III시HCV5'UTR DNA서렬구비계동자활성적핵심결구,결구역I대기5'UTR DNA서렬적계동자활성구유억제효응,이결구역II화IV가증강5'UTR DNA서렬적계동자활성;HCV5'UTR cDNA적계동자공능무조직특이성,단재정상적간세포(L02)중표체최고.
