CAJ | 학술논문

目的从人源噬菌体抗体库中筛选抗SARS独特型抗体为SARS的诊断及疫苗的研究奠定基础.方法以混合SARS病人恢复期血清免疫球蛋白(Ig)作为筛选分子,从噬菌体抗体库中筛选出能与病人血清IgG(IgM)结合的抗体,并通过与混合正常人血清Ig作负性筛选,从而获得抗SARS病毒的独特型抗体(Ald).通过4轮"吸附-洗涤-扩增",从最后一轮所得单克隆菌株中分别通过ELISA筛选出能和SARS病人恢复期血清Ig结合的菌株,提取质粒DNA,并对PCR扩增产物进行DNA序列测定,最后用所筛选的克隆通过与不同人群血清反应,证实其特异性.结果随机挑选经第4轮筛选后的200个单克隆菌落,其中有10个与SARS病人恢复期血清Ig结合的OD值明显高于其与正常人Ig结合的OD值;以上10个克隆经PCR扩增,其中有6个克隆于1 000bp处有电泳条带;其DNA序列经与BLASF数据库和IMGT/QUEST软件比对有5个均与人的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)高度同源,且与其同源性最高的人Ig的VH属VHI亚群,VL属k链,属VKⅡ亚群;最后确认有3个克隆其噬菌体抗体和SARS病人血清Ig结合的OD值均明显高于与正常人血清Ig结合的OD值.结论利用抗体库技术可不经免疫制备特异性抗SARS抗体独特型抗体,为SARS诊断及疫苗的研制奠定基础.
목적종인원서균체항체고중사선항SARS독특형항체위SARS적진단급역묘적연구전정기출.방법이혼합SARS병인회복기혈청면역구단백(Ig)작위사선분자,종서균체항체고중사선출능여병인혈청IgG(IgM)결합적항체,병통과여혼합정상인혈청Ig작부성사선,종이획득항SARS병독적독특형항체(Ald).통과4륜"흡부-세조-확증",종최후일륜소득단극륭균주중분별통과ELISA사선출능화SARS병인회복기혈청Ig결합적균주,제취질립DNA,병대PCR확증산물진행DNA서렬측정,최후용소사선적극륭통과여불동인군혈청반응,증실기특이성.결과수궤도선경제4륜사선후적200개단극륭균락,기중유10개여SARS병인회복기혈청Ig결합적OD치명현고우기여정상인Ig결합적OD치;이상10개극륭경PCR확증,기중유6개극륭우1 000bp처유전영조대;기DNA서렬경여BLASF수거고화IMGT/QUEST연건비대유5개균여인적중련가변구(VH)화경련가변구(VL)고도동원,차여기동원성최고적인Ig적VH속VHI아군,VL속k련,속VKⅡ아군;최후학인유3개극륭기서균체항체화SARS병인혈청Ig결합적OD치균명현고우여정상인혈청Ig결합적OD치.결론이용항체고기술가불경면역제비특이성항SARS항체독특형항체,위SARS진단급역묘적연제전정기출.