禽流感H5、H7、H9亚型多重实时荧光RT-PCR检测方法的建立
금류감H5、H7、H9아형다중실시형광RT-PCR검측방법적건립
Development of a Multiplex Real-time Reverse Transcriptase PCR Assay for Simultaneous Identification of Avian H5,H7 and H9 Hemagglutinin Subtypes
  • 万方数据
    病毒学报 병독학보
    CHINESE JOURNAL OF VIROLOGY
    2006年 2期 131-136 ,共6页

    秦智锋%吕建强%肖性龙%钟安清%林镜中%黄运生%林庆燕%陈书琨%金显忠%林苗%刘胜利

    진지봉%려건강%초성룡%종안청%림경중%황운생%림경연%진서곤%금현충%림묘%류성리

    禽流感%H5亚型%H7亚型%H9亚型%实时荧光RT-PCR%多重实时检测 禽流感%H5亞型%H7亞型%H9亞型%實時熒光RT-PCR%多重實時檢測
    금류감%H5아형%H7아형%H9아형%실시형광RT-PCR%다중실시검측
    为了对致病性强、危害性大的H5、H7、H9亚型禽流感病毒进行同时集成化快速检测,通过对GenBank已报道的禽流感病毒的HA基因进行序列分析比较,设计了H5、H7、H9 3个亚型的特异性引物和分别用3个荧光基团标记的Taqman MGB核酸探针.将各个亚型引物与探针优化组合,筛选出能够同时检测禽流感病毒 H5、H7、H9 3个亚型、且对Ct值和扩增效率影响不大的3组引物和探针,建立了三重实时荧光RT-PCR方法.该方法特异性好,在我们检测的样品中,没有发现假阳性和假阴性现象.同时敏感性高,检测禽流感病毒 H5、H7、H9亚型的敏感性分别达到1 000、1 000、500个模板拷贝数;此外抗干扰能力强,对禽流感H5、H7、H9 3个亚型的不同模板浓度进行组合,仍可有效地同时检测3个病毒亚型.所建立的方法对保存的89个禽流感病毒样品进行检测,结果与经典检测方法(病毒分离鉴定、HA、HI)的符合率达100%.用上述建立的方法与鸡胚分离法同时对新鲜采集的4 000多份临床样品进行检测,两种方法的检测结果符合率为100%.
    위료대치병성강、위해성대적H5、H7、H9아형금류감병독진행동시집성화쾌속검측,통과대GenBank이보도적금류감병독적HA기인진행서렬분석비교,설계료H5、H7、H9 3개아형적특이성인물화분별용3개형광기단표기적Taqman MGB핵산탐침.장각개아형인물여탐침우화조합,사선출능구동시검측금류감병독 H5、H7、H9 3개아형、차대Ct치화확증효솔영향불대적3조인물화탐침,건립료삼중실시형광RT-PCR방법.해방법특이성호,재아문검측적양품중,몰유발현가양성화가음성현상.동시민감성고,검측금류감병독 H5、H7、H9아형적민감성분별체도1 000、1 000、500개모판고패수;차외항간우능력강,대금류감H5、H7、H9 3개아형적불동모판농도진행조합,잉가유효지동시검측3개병독아형.소건립적방법대보존적89개금류감병독양품진행검측,결과여경전검측방법(병독분리감정、HA、HI)적부합솔체100%.용상술건립적방법여계배분리법동시대신선채집적4 000다빈림상양품진행검측,량충방법적검측결과부합솔위100%.
    원문보기 원문다운로드 사이트로이동
저자의 최근 논문