浙江大学学报（医学版）
浙江大學學報（醫學版）
절강대학학보（의학판）
JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY MEDICAL SCIENCES
2008年
6期
605-611
,共7页
孙爱华%樊欢%夏肖萍%李向阳%严杰
孫愛華%樊歡%夏肖萍%李嚮暘%嚴傑
손애화%번환%하초평%리향양%엄걸
链球菌,肺炎/药物作用%基因细菌%β内酰胺抗药性%二元信号传导系统%ciaH/ciaR基因%β-内酰胺类抗生素%耐药性
鏈毬菌,肺炎/藥物作用%基因細菌%β內酰胺抗藥性%二元信號傳導繫統%ciaH/ciaR基因%β-內酰胺類抗生素%耐藥性
련구균,폐염/약물작용%기인세균%β내선알항약성%이원신호전도계통%ciaH/ciaR기인%β-내선알류항생소%내약성
目的:构建肺炎链球菌ciaH和ciaR基因的原核表达系统,探讨CiaH和CiaR封闭后细菌耐药性变化.方法:采用PCR扩增全长ciaH和ciaR基因,以常规基因工程技术建立其原核表达系统.采用SDS-PAGE及Bio-Rad凝胶图象分析系统检测目的重组蛋白rCiaH和rCiaR表达量.制备rCiaH和rCiaR兔抗血清及其IgG.检测IgG胞外或胞内封闭肺炎链球菌菌株CiaH和CiaR后,细菌对青霉素和头孢噻肟耐药性的变化.结果:与报道序列比较,所克隆的ciaH和ciaR基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为99.9%～100%和100%.所构建的工程菌E.coli BL21DE3pET42a-ciaH和E.coli BL21DE3pET42a-ciaR能高效表达目的重组蛋白rCiaH和rCiaR,其产量分别高达细菌总蛋白的33%和45%.rCiaH、rCiaR抗血清及其IgG免疫双扩散效价分别为1∶4、1∶4和1∶1、1∶1.CiaH-IgG胞外或胞内封闭CiaH、CiaR-IgG胞内封闭CiaR后,青霉素及头孢噻肟敏感菌株可出现对两种抗生素的耐药性,但对耐药菌株耐药性无明显影响.结论:成功地构建了肺炎链球菌ciaH/ciaR基因原核表达系统,为深入研究该TCS与耐药性关系奠定了基础.CiaH和CiaR均与肺炎链球菌对青霉素及头孢噻肟耐药性有关.
目的:構建肺炎鏈毬菌ciaH和ciaR基因的原覈錶達繫統,探討CiaH和CiaR封閉後細菌耐藥性變化.方法:採用PCR擴增全長ciaH和ciaR基因,以常規基因工程技術建立其原覈錶達繫統.採用SDS-PAGE及Bio-Rad凝膠圖象分析繫統檢測目的重組蛋白rCiaH和rCiaR錶達量.製備rCiaH和rCiaR兔抗血清及其IgG.檢測IgG胞外或胞內封閉肺炎鏈毬菌菌株CiaH和CiaR後,細菌對青黴素和頭孢噻肟耐藥性的變化.結果:與報道序列比較,所剋隆的ciaH和ciaR基因覈苷痠和氨基痠序列相似性分彆為99.9%～100%和100%.所構建的工程菌E.coli BL21DE3pET42a-ciaH和E.coli BL21DE3pET42a-ciaR能高效錶達目的重組蛋白rCiaH和rCiaR,其產量分彆高達細菌總蛋白的33%和45%.rCiaH、rCiaR抗血清及其IgG免疫雙擴散效價分彆為1∶4、1∶4和1∶1、1∶1.CiaH-IgG胞外或胞內封閉CiaH、CiaR-IgG胞內封閉CiaR後,青黴素及頭孢噻肟敏感菌株可齣現對兩種抗生素的耐藥性,但對耐藥菌株耐藥性無明顯影響.結論:成功地構建瞭肺炎鏈毬菌ciaH/ciaR基因原覈錶達繫統,為深入研究該TCS與耐藥性關繫奠定瞭基礎.CiaH和CiaR均與肺炎鏈毬菌對青黴素及頭孢噻肟耐藥性有關.
목적:구건폐염련구균ciaH화ciaR기인적원핵표체계통,탐토CiaH화CiaR봉폐후세균내약성변화.방법:채용PCR확증전장ciaH화ciaR기인,이상규기인공정기술건립기원핵표체계통.채용SDS-PAGE급Bio-Rad응효도상분석계통검측목적중조단백rCiaH화rCiaR표체량.제비rCiaH화rCiaR토항혈청급기IgG.검측IgG포외혹포내봉폐폐염련구균균주CiaH화CiaR후,세균대청매소화두포새우내약성적변화.결과:여보도서렬비교,소극륭적ciaH화ciaR기인핵감산화안기산서렬상사성분별위99.9%～100%화100%.소구건적공정균E.coli BL21DE3pET42a-ciaH화E.coli BL21DE3pET42a-ciaR능고효표체목적중조단백rCiaH화rCiaR,기산량분별고체세균총단백적33%화45%.rCiaH、rCiaR항혈청급기IgG면역쌍확산효개분별위1∶4、1∶4화1∶1、1∶1.CiaH-IgG포외혹포내봉폐CiaH、CiaR-IgG포내봉폐CiaR후,청매소급두포새우민감균주가출현대량충항생소적내약성,단대내약균주내약성무명현영향.결론:성공지구건료폐염련구균ciaH/ciaR기인원핵표체계통,위심입연구해TCS여내약성관계전정료기출.CiaH화CiaR균여폐염련구균대청매소급두포새우내약성유관.
