中国药科大学学报
中國藥科大學學報
중국약과대학학보
JOURNAL OF CHINA PHARMACEUTICAL UNIVERSITY
2004年
3期
276-279
,共4页
庞实锋%吴晓萍%李校堃%郑青%于平野%曲红艳%王艳萍
龐實鋒%吳曉萍%李校堃%鄭青%于平野%麯紅豔%王豔萍
방실봉%오효평%리교곤%정청%우평야%곡홍염%왕염평
瘦素%绿色荧光蛋白(GFP)%融合基因%高效表达
瘦素%綠色熒光蛋白(GFP)%融閤基因%高效錶達
수소%록색형광단백(GFP)%융합기인%고효표체
目的: 为了便于追踪瘦素(Leptin)在体内的去向,对其进行体内定位,设计合成Leptin荧光分子蛋白探针.方法:用PCR技术将Leptin cDNA与绿色荧光蛋白cDNA构建成融合基因LG,然后将其克隆进原核表达载体pET3c中,构建成原核表达工程菌BL21(DE3)/pET3c-LG.用Western-blot杂交检测重组蛋白的免疫原性,用荧光显微镜观察融合蛋白及其诱导菌休的发光活性.结果:DNA测序结果证实设计合成的融合基因与预期一致;构建的工程菌BL21(DE3)/pET3c-LG获得了表达,融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的40%以上;Western-blot杂交检测表明重组蛋白具有Leptin的免疫原性;经IPTG诱导后的菌体及蛋白粗提液在荧光显微镜下可观察到其能发射出强烈的绿色荧光.结论:融合基因在大肠杆菌中实现了高效表达,表达的融合蛋白具Leptin的免疫原性和GFP的发光特性.为利用绿色荧光蛋白标记Leptin在动物体内的药物治疗的研究提供了一种新的途径.
目的: 為瞭便于追蹤瘦素(Leptin)在體內的去嚮,對其進行體內定位,設計閤成Leptin熒光分子蛋白探針.方法:用PCR技術將Leptin cDNA與綠色熒光蛋白cDNA構建成融閤基因LG,然後將其剋隆進原覈錶達載體pET3c中,構建成原覈錶達工程菌BL21(DE3)/pET3c-LG.用Western-blot雜交檢測重組蛋白的免疫原性,用熒光顯微鏡觀察融閤蛋白及其誘導菌休的髮光活性.結果:DNA測序結果證實設計閤成的融閤基因與預期一緻;構建的工程菌BL21(DE3)/pET3c-LG穫得瞭錶達,融閤蛋白的錶達量佔菌體總蛋白的40%以上;Western-blot雜交檢測錶明重組蛋白具有Leptin的免疫原性;經IPTG誘導後的菌體及蛋白粗提液在熒光顯微鏡下可觀察到其能髮射齣彊烈的綠色熒光.結論:融閤基因在大腸桿菌中實現瞭高效錶達,錶達的融閤蛋白具Leptin的免疫原性和GFP的髮光特性.為利用綠色熒光蛋白標記Leptin在動物體內的藥物治療的研究提供瞭一種新的途徑.
목적: 위료편우추종수소(Leptin)재체내적거향,대기진행체내정위,설계합성Leptin형광분자단백탐침.방법:용PCR기술장Leptin cDNA여록색형광단백cDNA구건성융합기인LG,연후장기극륭진원핵표체재체pET3c중,구건성원핵표체공정균BL21(DE3)/pET3c-LG.용Western-blot잡교검측중조단백적면역원성,용형광현미경관찰융합단백급기유도균휴적발광활성.결과:DNA측서결과증실설계합성적융합기인여예기일치;구건적공정균BL21(DE3)/pET3c-LG획득료표체,융합단백적표체량점균체총단백적40%이상;Western-blot잡교검측표명중조단백구유Leptin적면역원성;경IPTG유도후적균체급단백조제액재형광현미경하가관찰도기능발사출강렬적록색형광.결론:융합기인재대장간균중실현료고효표체,표체적융합단백구Leptin적면역원성화GFP적발광특성.위이용록색형광단백표기Leptin재동물체내적약물치료적연구제공료일충신적도경.
