CAJ | 학술논문

背景:表皮干细胞对于修复皮肤缺损具有重要意义,但如何方便、快捷地对所获取的表皮干细胞进行纯化培养一直没有比较好的技术方法.目的:拟应用胰蛋白酶差速脱壁法去除表皮干细胞中混杂的成纤维细胞.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2006-06/2007-06在解放军军事医学科学院输血医学研究所干细胞与再生医学研究室完成.材料:实验所用皮肤来源于20一30岁女性乳房缩小整形术患者,由北京协和医院整形外科提供.方法:无菌条件下切取皮肤,剪除皮下脂肪组织,采用胶原酶/Dispase酶和胰蛋白酶两步法体外分离培养表皮干细胞.待细胞生长达70%～80%融合时,加入胰蛋白酶消化尚未脱壁的细胞,30 s～1 min后吸出脱壁细胞,同法传代培养至第5代细胞.主要观察指标:第1,5代表皮干细胞表面标志CD29、CIM9f、CD71的表达.流式细胞仪检测第5代细胞生长周期.免疫荧光检测第5代表皮干细胞和传代时胰蛋白酶消化30 s～1 min即脱壁细胞角蛋白19及波形蛋白的表达.透射电镜观察表皮干细胞超微结构.结果:第1代表皮干细胞CD29阳性率94.32%,CD49f阳性率86.24%,CD71呈弱阳性,经过4次胰蛋白酶差速脱壁去除混杂细胞后,第5代表皮干细胞CD29阳性率96.77%,CD49f阳性率96.31,CD71呈弱阳性,82.58%表皮干细胞处于G0～G1期.第5代表皮干细胞角蛋白19呈阳性,波形蛋白呈阴性,而传代时胰蛋白酶消化脱壁的细胞角蛋白19呈阴性,波形蛋白呈阳性,证实为成纤维细胞.表皮干细胞呈克隆样生长,透射电镜下胞质中可见呈束状排列的角蛋白丝.结论:应用胰蛋白酶差速脱壁法能够简单,有效地获取纯化的表皮干细胞.
배경:표피간세포대우수복피부결손구유중요의의,단여하방편、쾌첩지대소획취적표피간세포진행순화배양일직몰유비교호적기술방법.목적:의응용이단백매차속탈벽법거제표피간세포중혼잡적성섬유세포.설계、시간급지점:세포학체외관찰,우2006-06/2007-06재해방군군사의학과학원수혈의학연구소간세포여재생의학연구실완성.재료:실험소용피부래원우20일30세녀성유방축소정형술환자,유북경협화의원정형외과제공.방법:무균조건하절취피부,전제피하지방조직,채용효원매/Dispase매화이단백매량보법체외분리배양표피간세포.대세포생장체70%～80%융합시,가입이단백매소화상미탈벽적세포,30 s～1 min후흡출탈벽세포,동법전대배양지제5대세포.주요관찰지표:제1,5대표피간세포표면표지CD29、CIM9f、CD71적표체.류식세포의검측제5대세포생장주기.면역형광검측제5대표피간세포화전대시이단백매소화30 s～1 min즉탈벽세포각단백19급파형단백적표체.투사전경관찰표피간세포초미결구.결과:제1대표피간세포CD29양성솔94.32%,CD49f양성솔86.24%,CD71정약양성,경과4차이단백매차속탈벽거제혼잡세포후,제5대표피간세포CD29양성솔96.77%,CD49f양성솔96.31,CD71정약양성,82.58%표피간세포처우G0～G1기.제5대표피간세포각단백19정양성,파형단백정음성,이전대시이단백매소화탈벽적세포각단백19정음성,파형단백정양성,증실위성섬유세포.표피간세포정극륭양생장,투사전경하포질중가견정속상배렬적각단백사.결론:응용이단백매차속탈벽법능구간단,유효지획취순화적표피간세포.