中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2000年
6期
722-726
,共5页
孙雷%高新胜%黄仪秀%朱圣庚
孫雷%高新勝%黃儀秀%硃聖庚
손뢰%고신성%황의수%주골경
噬菌体抗体库%亲和选择%血纤维蛋白特异抗体%DNA改组%抗体成熟
噬菌體抗體庫%親和選擇%血纖維蛋白特異抗體%DNA改組%抗體成熟
서균체항체고%친화선택%혈섬유단백특이항체%DNA개조%항체성숙
为构建小鼠噬菌体抗体库,以获得对人血纤维蛋白特异的抗体,由小鼠脾脏提取mRNA,经反转录PCR扩增出抗体重链、轻链可变区基因片段,将二者和一段编码十五肽(Gly4er)3的DNA接头借助重组PCR组装成为单链抗体(single-chin antibody,SAb)基因.将单链抗体基因插入噬菌体展示载体pCANTAB-5E,通过电击法转化大肠杆菌TG1细胞,用辅助噬菌体M13K07超感染,构建了库容量在108以上的噬菌体单链抗体库.利用亲和选择方法(淘选),从噬菌体抗体库中选得血纤维蛋白特异的单链抗体.模拟抗体成熟过程,用DNA改组(DNA shuffing)技术使抗体基因重新组合,构建新的改组抗体库,并从中选择到提高了亲和力的噬菌体单链抗体.抗体基因在大肠杆菌中表达,表达蛋白经Sephadex G-75柱层析分离,得到初步纯化的单链抗体蛋白.
為構建小鼠噬菌體抗體庫,以穫得對人血纖維蛋白特異的抗體,由小鼠脾髒提取mRNA,經反轉錄PCR擴增齣抗體重鏈、輕鏈可變區基因片段,將二者和一段編碼十五肽(Gly4er)3的DNA接頭藉助重組PCR組裝成為單鏈抗體(single-chin antibody,SAb)基因.將單鏈抗體基因插入噬菌體展示載體pCANTAB-5E,通過電擊法轉化大腸桿菌TG1細胞,用輔助噬菌體M13K07超感染,構建瞭庫容量在108以上的噬菌體單鏈抗體庫.利用親和選擇方法(淘選),從噬菌體抗體庫中選得血纖維蛋白特異的單鏈抗體.模擬抗體成熟過程,用DNA改組(DNA shuffing)技術使抗體基因重新組閤,構建新的改組抗體庫,併從中選擇到提高瞭親和力的噬菌體單鏈抗體.抗體基因在大腸桿菌中錶達,錶達蛋白經Sephadex G-75柱層析分離,得到初步純化的單鏈抗體蛋白.
위구건소서서균체항체고,이획득대인혈섬유단백특이적항체,유소서비장제취mRNA,경반전록PCR확증출항체중련、경련가변구기인편단,장이자화일단편마십오태(Gly4er)3적DNA접두차조중조PCR조장성위단련항체(single-chin antibody,SAb)기인.장단련항체기인삽입서균체전시재체pCANTAB-5E,통과전격법전화대장간균TG1세포,용보조서균체M13K07초감염,구건료고용량재108이상적서균체단련항체고.이용친화선택방법(도선),종서균체항체고중선득혈섬유단백특이적단련항체.모의항체성숙과정,용DNA개조(DNA shuffing)기술사항체기인중신조합,구건신적개조항체고,병종중선택도제고료친화력적서균체단련항체.항체기인재대장간균중표체,표체단백경Sephadex G-75주층석분리,득도초보순화적단련항체단백.
