生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2000年
6期
723-726
,共4页
毕赤酵母%恶性疟原虫%疟疾疫苗%裂殖子表面蛋白1
畢赤酵母%噁性瘧原蟲%瘧疾疫苗%裂殖子錶麵蛋白1
필적효모%악성학원충%학질역묘%렬식자표면단백1
恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1是当今疟疾疫苗主要的候选抗原.由于天然MSP1基因AT含量异常高(为74%),使得克隆全长天然基因无法实现.本文已全合成了msp1基因(4940bp),解决了该天然基因在异源系统中不稳定的问题.为制备大量msp1重组蛋白进行疫苗有效性试验,本研究建立了msp1基因在毕赤酵母中的表达,将合成的msp1基因克隆到毕赤酵母胞内表达载体pPIC3.5,构建了重组质粒pPIC3.5/msp1,用电击转化毕赤酵母得到重组转化子,经PCR证实msp1基因已整合于毕赤酵母染色体中.含有重组表达质粒的毕赤酵母菌经甲醇诱导后表达出全长msp1重组蛋白.表达产物能与识别MSP1分子二硫键依赖构象表位的特异性单抗发生很强的反应,表明msp1重组蛋白至少在该表位构象上与天然蛋白一致.从毕赤酵母中分离得到大量msp1为开展该蛋白的结构与功能,特别是测定其疟疾保护性免疫提供可能.
噁性瘧原蟲裂殖子錶麵蛋白1是噹今瘧疾疫苗主要的候選抗原.由于天然MSP1基因AT含量異常高(為74%),使得剋隆全長天然基因無法實現.本文已全閤成瞭msp1基因(4940bp),解決瞭該天然基因在異源繫統中不穩定的問題.為製備大量msp1重組蛋白進行疫苗有效性試驗,本研究建立瞭msp1基因在畢赤酵母中的錶達,將閤成的msp1基因剋隆到畢赤酵母胞內錶達載體pPIC3.5,構建瞭重組質粒pPIC3.5/msp1,用電擊轉化畢赤酵母得到重組轉化子,經PCR證實msp1基因已整閤于畢赤酵母染色體中.含有重組錶達質粒的畢赤酵母菌經甲醇誘導後錶達齣全長msp1重組蛋白.錶達產物能與識彆MSP1分子二硫鍵依賴構象錶位的特異性單抗髮生很彊的反應,錶明msp1重組蛋白至少在該錶位構象上與天然蛋白一緻.從畢赤酵母中分離得到大量msp1為開展該蛋白的結構與功能,特彆是測定其瘧疾保護性免疫提供可能.
악성학원충렬식자표면단백1시당금학질역묘주요적후선항원.유우천연MSP1기인AT함량이상고(위74%),사득극륭전장천연기인무법실현.본문이전합성료msp1기인(4940bp),해결료해천연기인재이원계통중불은정적문제.위제비대량msp1중조단백진행역묘유효성시험,본연구건립료msp1기인재필적효모중적표체,장합성적msp1기인극륭도필적효모포내표체재체pPIC3.5,구건료중조질립pPIC3.5/msp1,용전격전화필적효모득도중조전화자,경PCR증실msp1기인이정합우필적효모염색체중.함유중조표체질립적필적효모균경갑순유도후표체출전장msp1중조단백.표체산물능여식별MSP1분자이류건의뢰구상표위적특이성단항발생흔강적반응,표명msp1중조단백지소재해표위구상상여천연단백일치.종필적효모중분리득도대량msp1위개전해단백적결구여공능,특별시측정기학질보호성면역제공가능.
