第二军医大学学报
第二軍醫大學學報
제이군의대학학보
ACADEMIC JOURNAL OF SECOND MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
2003年
2期
188-191
,共4页
严鸣%毛积芳%钟纪根%何建%朱秋峰%娄淑杰%徐仁宝
嚴鳴%毛積芳%鐘紀根%何建%硃鞦峰%婁淑傑%徐仁寶
엄명%모적방%종기근%하건%주추봉%루숙걸%서인보
巨噬细胞分化抗原1%蓝色荧光蛋白%融合蛋白
巨噬細胞分化抗原1%藍色熒光蛋白%融閤蛋白
거서세포분화항원1%람색형광단백%융합단백
目的:构建并表达巨噬细胞分化抗原1(Mac-1)的α链CD11b与蓝色荧光蛋白(BFP)的融合蛋白CD11b-BFP,为进一步直视研究Mac-1在白细胞内的分布、走向及归宿提供物质条件.方法:首先将CD11b的全长cDNA进行酶切并获得2个片段,将其中含有终止密码的片段作为模板,通过设计引物进行PCR,获得不含有终止密码的该片段,然后与另一片段进行连接,形成不含有终止密码的Mac-1全长cDNA, 将其插入到表达载体pEBFP-N1中,构建完成CD11b-BFP融合基因,最后将其转染至U937细胞株中,通过荧光显微镜观察与流式细胞术检测Mac-1的表达及其黏附活性来进行鉴定.结果:经酶切鉴定,pCD11b-BFP构建完全正确,转染U937细胞株后,可见CD11b-BFP融合蛋白发出的蓝色荧光.结论:构建完成CD11b-BFP融合基因并在U937细胞株中进行表达.
目的:構建併錶達巨噬細胞分化抗原1(Mac-1)的α鏈CD11b與藍色熒光蛋白(BFP)的融閤蛋白CD11b-BFP,為進一步直視研究Mac-1在白細胞內的分佈、走嚮及歸宿提供物質條件.方法:首先將CD11b的全長cDNA進行酶切併穫得2箇片段,將其中含有終止密碼的片段作為模闆,通過設計引物進行PCR,穫得不含有終止密碼的該片段,然後與另一片段進行連接,形成不含有終止密碼的Mac-1全長cDNA, 將其插入到錶達載體pEBFP-N1中,構建完成CD11b-BFP融閤基因,最後將其轉染至U937細胞株中,通過熒光顯微鏡觀察與流式細胞術檢測Mac-1的錶達及其黏附活性來進行鑒定.結果:經酶切鑒定,pCD11b-BFP構建完全正確,轉染U937細胞株後,可見CD11b-BFP融閤蛋白髮齣的藍色熒光.結論:構建完成CD11b-BFP融閤基因併在U937細胞株中進行錶達.
목적:구건병표체거서세포분화항원1(Mac-1)적α련CD11b여람색형광단백(BFP)적융합단백CD11b-BFP,위진일보직시연구Mac-1재백세포내적분포、주향급귀숙제공물질조건.방법:수선장CD11b적전장cDNA진행매절병획득2개편단,장기중함유종지밀마적편단작위모판,통과설계인물진행PCR,획득불함유종지밀마적해편단,연후여령일편단진행련접,형성불함유종지밀마적Mac-1전장cDNA, 장기삽입도표체재체pEBFP-N1중,구건완성CD11b-BFP융합기인,최후장기전염지U937세포주중,통과형광현미경관찰여류식세포술검측Mac-1적표체급기점부활성래진행감정.결과:경매절감정,pCD11b-BFP구건완전정학,전염U937세포주후,가견CD11b-BFP융합단백발출적람색형광.결론:구건완성CD11b-BFP융합기인병재U937세포주중진행표체.
