苏州大学学报(医学版)
囌州大學學報(醫學版)
소주대학학보(의학판)
SUZHOU UNIVERSITY JOURNAL OF MEDICAL SCIENCE
2003年
2期
137-141
,共5页
邵晓雁%沈飞%邵波静%李佩霞%阮长耿
邵曉雁%瀋飛%邵波靜%李珮霞%阮長耿
소효안%침비%소파정%리패하%원장경
血管性血友病因子%单克隆%抗体%鉴定
血管性血友病因子%單剋隆%抗體%鑒定
혈관성혈우병인자%단극륭%항체%감정
目的研制抗人血管性血友病因子(vWF)单克隆抗体(McAb),鉴定其各种生物学特性.方法Ⅷ因子浓缩物经Sepharose 4B凝胶柱提纯出vWF蛋白,免疫Balb/c小鼠,按常规方法融合并经间接ELISA方法筛选,制备稳定分泌抗vWFMcAb的细胞株,并对McAb的亚型、免疫活性及组织特异性等进行鉴定,运用放射免疫方法等与单抗SZ-29,SZ-34进行比较.结果分离纯化出vWF,vWF抗原含量为120IU/mg,并成功制备了一株抗人血管性血友病因子McAb,暂命名为4E10.琼脂糖双扩散鉴定为IgG1类,ELISA法测定其腹水效价为5×10-5.放射免疫分析证实McAb4E10能特异的与血浆中vWF蛋白结合,应用间接免疫荧光法显示出与人脐静脉内皮细胞内vWF所特有的颗粒型荧光反应.流式细胞仪及免疫组化法测定表明McAb4E10与人脐静脉内皮细胞反应呈阳性,与外周血红细胞、白细胞、未活化的血小板不反应,而与其他组织细胞没有反应.放射免疫测定证实McAb4E10与SZ-29,SZ-34识别vWF蛋白上不同的结构.还原条件下Western blot法证实McAb4E10和SZ-29都能识别相对分子量为225kD和180kD左右的单链蛋白多肽.结论制备出了抗人血管性血友病因子单克隆抗体4E10(McAb4E10),它能特异识别血浆及内皮细胞的vWF,将对相关血管性疾病的诊断分析提供有用的工具,也可能有利于对vWF多聚物的功能位点的深入研究.
目的研製抗人血管性血友病因子(vWF)單剋隆抗體(McAb),鑒定其各種生物學特性.方法Ⅷ因子濃縮物經Sepharose 4B凝膠柱提純齣vWF蛋白,免疫Balb/c小鼠,按常規方法融閤併經間接ELISA方法篩選,製備穩定分泌抗vWFMcAb的細胞株,併對McAb的亞型、免疫活性及組織特異性等進行鑒定,運用放射免疫方法等與單抗SZ-29,SZ-34進行比較.結果分離純化齣vWF,vWF抗原含量為120IU/mg,併成功製備瞭一株抗人血管性血友病因子McAb,暫命名為4E10.瓊脂糖雙擴散鑒定為IgG1類,ELISA法測定其腹水效價為5×10-5.放射免疫分析證實McAb4E10能特異的與血漿中vWF蛋白結閤,應用間接免疫熒光法顯示齣與人臍靜脈內皮細胞內vWF所特有的顆粒型熒光反應.流式細胞儀及免疫組化法測定錶明McAb4E10與人臍靜脈內皮細胞反應呈暘性,與外週血紅細胞、白細胞、未活化的血小闆不反應,而與其他組織細胞沒有反應.放射免疫測定證實McAb4E10與SZ-29,SZ-34識彆vWF蛋白上不同的結構.還原條件下Western blot法證實McAb4E10和SZ-29都能識彆相對分子量為225kD和180kD左右的單鏈蛋白多肽.結論製備齣瞭抗人血管性血友病因子單剋隆抗體4E10(McAb4E10),它能特異識彆血漿及內皮細胞的vWF,將對相關血管性疾病的診斷分析提供有用的工具,也可能有利于對vWF多聚物的功能位點的深入研究.
목적연제항인혈관성혈우병인자(vWF)단극륭항체(McAb),감정기각충생물학특성.방법Ⅷ인자농축물경Sepharose 4B응효주제순출vWF단백,면역Balb/c소서,안상규방법융합병경간접ELISA방법사선,제비은정분비항vWFMcAb적세포주,병대McAb적아형、면역활성급조직특이성등진행감정,운용방사면역방법등여단항SZ-29,SZ-34진행비교.결과분리순화출vWF,vWF항원함량위120IU/mg,병성공제비료일주항인혈관성혈우병인자McAb,잠명명위4E10.경지당쌍확산감정위IgG1류,ELISA법측정기복수효개위5×10-5.방사면역분석증실McAb4E10능특이적여혈장중vWF단백결합,응용간접면역형광법현시출여인제정맥내피세포내vWF소특유적과립형형광반응.류식세포의급면역조화법측정표명McAb4E10여인제정맥내피세포반응정양성,여외주혈홍세포、백세포、미활화적혈소판불반응,이여기타조직세포몰유반응.방사면역측정증실McAb4E10여SZ-29,SZ-34식별vWF단백상불동적결구.환원조건하Western blot법증실McAb4E10화SZ-29도능식별상대분자량위225kD화180kD좌우적단련단백다태.결론제비출료항인혈관성혈우병인자단극륭항체4E10(McAb4E10),타능특이식별혈장급내피세포적vWF,장대상관혈관성질병적진단분석제공유용적공구,야가능유리우대vWF다취물적공능위점적심입연구.
