免疫学杂志
免疫學雜誌
면역학잡지
IMMUNOLOGICAL JOURNAL
2002年
4期
253-257
,共5页
孙强明%戴长柏%李洪钊%丁云菲%马雁冰%刘红岩%徐维明
孫彊明%戴長柏%李洪釗%丁雲菲%馬雁冰%劉紅巖%徐維明
손강명%대장백%리홍쇠%정운비%마안빙%류홍암%서유명
IL-6%GM-CSF%融合蛋白%克隆%基因表达
IL-6%GM-CSF%融閤蛋白%剋隆%基因錶達
IL-6%GM-CSF%융합단백%극륭%기인표체
目的构建及表达具有huIL-6和huGM-CSF双重生物学活性的huIL-6-GM-CSF(9-127) 融合蛋白分子.方法应用PCR技术对huIL-6和huGM-CSF的基因分别加以改造,同时在二者之间加上连接肽序列(G-G-S-G-S)3, 克隆PCR产物,并构建成pBV220-IL-6-GM-CSF(9-127)表达质粒,将表达质粒导入E.coli DH5α中,诱导表达融合蛋白.通过Q Sepharose H.P. 离子交换柱和 Sephacryl S-200分子筛柱二步柱纯化以获取目的蛋白.使用MTT法测量其huIL-6和huGM-CSF生物学活性.结果 pUC18- IL-6-GM-CSF(9-127)的序列与理论设计完全一致,表达质粒在E.coli DH5α中得到高效表达,表达的融合蛋白占总蛋白含量的30%以上,表达产物以包涵体的形式存在.通过Q Sepharose H.P.离子交换柱和 Sephacryl S-200分子筛柱二步柱纯化及复性后获得目的蛋白,其纯度达到96%以上.融合蛋白具有huIL-6和huGM-CSF的双重生物学活性,其促进huIL-6依赖细胞株B9和huGM-CSF依赖细胞株TF-1增殖的比活性分别为2.86×107 U/mg和3.33×108 U/mg.结论获得了具有较高纯度和双重生物学活性的huIL-6-GM-CSF(9-127)融合蛋白.
目的構建及錶達具有huIL-6和huGM-CSF雙重生物學活性的huIL-6-GM-CSF(9-127) 融閤蛋白分子.方法應用PCR技術對huIL-6和huGM-CSF的基因分彆加以改造,同時在二者之間加上連接肽序列(G-G-S-G-S)3, 剋隆PCR產物,併構建成pBV220-IL-6-GM-CSF(9-127)錶達質粒,將錶達質粒導入E.coli DH5α中,誘導錶達融閤蛋白.通過Q Sepharose H.P. 離子交換柱和 Sephacryl S-200分子篩柱二步柱純化以穫取目的蛋白.使用MTT法測量其huIL-6和huGM-CSF生物學活性.結果 pUC18- IL-6-GM-CSF(9-127)的序列與理論設計完全一緻,錶達質粒在E.coli DH5α中得到高效錶達,錶達的融閤蛋白佔總蛋白含量的30%以上,錶達產物以包涵體的形式存在.通過Q Sepharose H.P.離子交換柱和 Sephacryl S-200分子篩柱二步柱純化及複性後穫得目的蛋白,其純度達到96%以上.融閤蛋白具有huIL-6和huGM-CSF的雙重生物學活性,其促進huIL-6依賴細胞株B9和huGM-CSF依賴細胞株TF-1增殖的比活性分彆為2.86×107 U/mg和3.33×108 U/mg.結論穫得瞭具有較高純度和雙重生物學活性的huIL-6-GM-CSF(9-127)融閤蛋白.
목적구건급표체구유huIL-6화huGM-CSF쌍중생물학활성적huIL-6-GM-CSF(9-127) 융합단백분자.방법응용PCR기술대huIL-6화huGM-CSF적기인분별가이개조,동시재이자지간가상련접태서렬(G-G-S-G-S)3, 극륭PCR산물,병구건성pBV220-IL-6-GM-CSF(9-127)표체질립,장표체질립도입E.coli DH5α중,유도표체융합단백.통과Q Sepharose H.P. 리자교환주화 Sephacryl S-200분자사주이보주순화이획취목적단백.사용MTT법측량기huIL-6화huGM-CSF생물학활성.결과 pUC18- IL-6-GM-CSF(9-127)적서렬여이론설계완전일치,표체질립재E.coli DH5α중득도고효표체,표체적융합단백점총단백함량적30%이상,표체산물이포함체적형식존재.통과Q Sepharose H.P.리자교환주화 Sephacryl S-200분자사주이보주순화급복성후획득목적단백,기순도체도96%이상.융합단백구유huIL-6화huGM-CSF적쌍중생물학활성,기촉진huIL-6의뢰세포주B9화huGM-CSF의뢰세포주TF-1증식적비활성분별위2.86×107 U/mg화3.33×108 U/mg.결론획득료구유교고순도화쌍중생물학활성적huIL-6-GM-CSF(9-127)융합단백.
