黑龙江八一农垦大学学报
黑龍江八一農墾大學學報
흑룡강팔일농은대학학보
JOURNAL OF HEILONGJIANG AUGUST FIRST LAND RECLAMATION UNIVERSITY
2002年
3期
60-63
,共4页
邓景致%欧阳红生%涂长春%朱平%张国利%廖晓萍%薛崧
鄧景緻%歐暘紅生%塗長春%硃平%張國利%廖曉萍%薛崧
산경치%구양홍생%도장춘%주평%장국리%료효평%설숭
绿脓杆菌外毒素A%组蛋白H4%嵌合蛋白%表达载体
綠膿桿菌外毒素A%組蛋白H4%嵌閤蛋白%錶達載體
록농간균외독소A%조단백H4%감합단백%표체재체
设计引物以pCDPT2质粒(含PEA全序列)为模板亚克隆获得PEA功能区Ⅰa及功能区Ⅱ基因片段(1100bp); 提取人染色体DNA作为模板,利用一对设计引物扩增获得了人组蛋白H4基因片段(316bp);将两基因片段连接,构建了融合基因中间载体pMD-18T-PEA-H4;融合基因经NcoⅠ及XhoⅠ酶切,以正确阅读框架插入相同酶切的pET-28A中,经酶切分析及PCR扩增检测,筛选到阳性克隆,其质粒测序结果表明成功地构建了毒性基因缺失的PEA与人组蛋白H4融合基因的原核表达载体;为进一步表达并获得大量的融合蛋白奠定了基础.
設計引物以pCDPT2質粒(含PEA全序列)為模闆亞剋隆穫得PEA功能區Ⅰa及功能區Ⅱ基因片段(1100bp); 提取人染色體DNA作為模闆,利用一對設計引物擴增穫得瞭人組蛋白H4基因片段(316bp);將兩基因片段連接,構建瞭融閤基因中間載體pMD-18T-PEA-H4;融閤基因經NcoⅠ及XhoⅠ酶切,以正確閱讀框架插入相同酶切的pET-28A中,經酶切分析及PCR擴增檢測,篩選到暘性剋隆,其質粒測序結果錶明成功地構建瞭毒性基因缺失的PEA與人組蛋白H4融閤基因的原覈錶達載體;為進一步錶達併穫得大量的融閤蛋白奠定瞭基礎.
설계인물이pCDPT2질립(함PEA전서렬)위모판아극륭획득PEA공능구Ⅰa급공능구Ⅱ기인편단(1100bp); 제취인염색체DNA작위모판,이용일대설계인물확증획득료인조단백H4기인편단(316bp);장량기인편단련접,구건료융합기인중간재체pMD-18T-PEA-H4;융합기인경NcoⅠ급XhoⅠ매절,이정학열독광가삽입상동매절적pET-28A중,경매절분석급PCR확증검측,사선도양성극륭,기질립측서결과표명성공지구건료독성기인결실적PEA여인조단백H4융합기인적원핵표체재체;위진일보표체병획득대량적융합단백전정료기출.
